【摘要】：目的:初步探討腺病毒36型(adenovirus type 36,Ad36)在誘導人脂肪源性干細胞分化為棕色脂肪細胞中的作用。方法:(1)分別用雞尾酒法和Ad36誘導hADSC分化為脂肪細胞,于誘導第2、4、6、8天油紅O染色觀察細胞成脂情況。(2)分別收取雞尾酒法誘導組和Ad36誘導組第0、2、4、6、8天的細胞,RT-qPCR方法檢測兩組中的LncRNA ROR,棕色脂肪細胞分化標記基因Cidea、Dio2、Fgf21、Ucp1、Prdm16,線粒體呼吸鏈和氧化磷酸化相關酶基因Cox5b、Atp5o、Atp6、Nd2以及Leptin mRNA表達水平;Western-blotting檢測兩組中上述基因蛋白質(zhì)表達水平。(3)siRNA敲低LncRNA ROR后,Ad36誘導hADSC分化為脂肪細胞過程中,分別收取敲低組和對照組第0、1、2、3、4天的細胞,RT-qPCR和Western-blotting方法分別檢測上述基因的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平。(4)利用透射電鏡的方法觀察并計算在誘導分化過程中雞尾酒法誘導組和Ad36誘導組線粒體數(shù)量的變化和差異。結果:(1)油紅O染色結果顯示:hADSC分化為脂肪細胞過程中,雞尾酒誘導組的脂肪細胞中脂滴較大,而Ad36誘導組則是顆粒狀較小脂滴。(2)RT-qPCR和Western-blotting結果顯示,hADSC分化為脂肪細胞過程中,與雞尾酒法誘導組相比,Ad36誘導組中LncRNA ROR、Cidea、Dio2、Fgf21、Ucp1、Prdm16、Cox5b、Atp5o、Atp6、Nd2mRNA及蛋白質(zhì)表達水平較雞尾酒法誘導組顯著升高,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.01或P0.05);Leptin mRNA及蛋白質(zhì)表達水平較雞尾酒法誘導組顯著降低,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。(3)siRNA敲低LncRNA ROR后,Ad36誘導hADSC分化為脂肪細胞過程中,與對照組相比,Cidea、Dio2、Fgf21、Ucp1、Prdm16、Cox5b、Atp5o、Atp6、Nd2 mRNA及蛋白質(zhì)表達水平較對照組顯著降低,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.01或P0.05)。(4)透射電鏡觀察到,在脂肪細胞分化過程中,與雞尾酒法誘導組相比,Ad36誘導組細胞內(nèi)的線粒體數(shù)量顯著升高,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.01或P0.05)。結論:Ad36可能通過上調(diào)LncRNA ROR加快了線粒體氧化磷酸化和能量消耗,進而促進了hADSC向棕色脂肪細胞分化。
【圖文】：

2336 和雞尾酒誘導 hADSC 細胞成脂比較(油紅 O 染色）(放大倍數(shù)：400×，，比例尺 Oil red O staining hADSC cells after induced by adinovirus 36 or cocktail meth(magnification: 400 x, scale: 50 microns)A、B、C、D 分別為 Ad36 誘導第 2、4、6、8 天的細胞 C and D,respectively, induce the cells of the 2nd, 4th, 6th and 8th days of Ad36 mE、F、G、H 分別為雞尾酒法誘導第 2、4、6、8 天的細胞 G, and H, respectively, induce the cells of the 2nd, 4th, 6th and 8th days of the c

脂肪細胞過程中，Ad36 誘導組和雞尾酒法胞分化標記基因、線粒體呼吸鏈和氧化磷酸化檢測脂肪細胞過程中，Ad36 誘導組和雞尾酒法誘測雞尾酒法誘導 hADSC 分化過程中，LncRNA ROADSC differentiation ,Ad36 induction and cocktail merences in the levels of mRNA expression of LncRNA均數(shù)±標準差第 0 天 第 2 天 第 4 天 第1.14±0.163.26±0.45 10.6±0.66 19.0 1.87±2.19 4.03±0.56 6.6P=0.008 P=0.006 P=
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R589.2

【參考文獻】

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本文編號：2694539