發(fā)布時(shí)間：2020-06-02 21:35

【摘要】：目的:通過(guò)建立哺乳期營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩模型,探討哺乳期營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩對(duì)大鼠糖脂代謝的影響以及導(dǎo)致胰島素抵抗的可能機(jī)制。方法:建立哺乳期營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩模型,將出生三日的幼鼠去雌留雄,隨機(jī)分為兩組,即小窩組(SL)3只/窩,標(biāo)準(zhǔn)組(NL)10只/窩,分別作為營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩組和對(duì)照組。母鼠給予普通飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)期間監(jiān)測(cè)大鼠體重,分別于三周齡和九周齡檢測(cè)大鼠空腹血糖并進(jìn)行處死,眼眶取血,取肝臟及內(nèi)臟脂肪組織并計(jì)算相應(yīng)指數(shù)。利用ELISA方法檢測(cè)大鼠血清中甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)總游離脂肪酸(NEFA)、瘦素(LEP)等脂代謝指標(biāo),檢測(cè)大鼠血清中胰島素(INS)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)等糖代謝指標(biāo)并計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、胰島β細(xì)胞功能評(píng)價(jià)指數(shù)(HOMA-β);實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot分析檢測(cè)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)mR NA及蛋白的表達(dá)量;基因芯片技術(shù)檢測(cè)microRNA(miRNA)譜,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)miR NA的表達(dá),初步篩選出與可能調(diào)節(jié)PPARs的miRNA。結(jié)果:1.與NL組相比,SL組大鼠在三周齡和九周齡時(shí)體重分別增加了23.8%和17.7%。與NL組相比,三周齡時(shí)SL組大鼠附睪脂肪、腎周脂肪含量均升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);附睪/體重、腎周/體重指數(shù)均升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。九周齡時(shí),SL組大鼠附睪脂肪含量、腎周脂肪含量、附睪/體重指數(shù)均升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);腎周/體重指數(shù)升高,但兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。三周齡時(shí)SL組內(nèi)臟脂肪指數(shù)均高于NL組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明哺乳期營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩模型造模成功。2.大鼠血清脂代謝指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:與NL組相比,三周齡時(shí),SL組大鼠TG、TC含量均升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);NEFA、HDL含量降低,但兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LEP含量升高,但兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。九周齡時(shí),SL組大鼠TG、TC、NEFA含量升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HDL含量降低,但兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LEP含量降低,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.大鼠血清糖代謝指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:與NL組相比,三周齡時(shí),SL組大鼠空腹血糖含量升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);IGF-1含量升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);INS含量升高,但兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GLUT4含量降低,但兩組之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。九周齡時(shí),SL組大鼠空腹血糖、INS含量升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GLUT4、IGF-1含量降低,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.大鼠胰島素抵抗評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果:與NL組相比,三周齡時(shí),SL組ISI、HOMA-IR升高,但兩組之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HOMA-β指數(shù)降低,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。九周齡時(shí),SL組ISI降低,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HOMA-IR升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HOMA-β升高,但兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.RT-PCR結(jié)果顯示:與NL組相比,三周齡時(shí),SL組大鼠肝臟組織PPARαmRNA和脂肪組織PPARγmRNA表達(dá)下降,但兩組之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);九周齡時(shí),SL組大鼠PPARαmRNA和脂肪組織PPARγmRNA表達(dá)升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示:與NL組相比,三周齡時(shí)SL組肝臟組織PPARα蛋白含量和九周齡時(shí)SL組肝臟組織PPARα蛋白含量表達(dá)下降表達(dá)下降,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。根據(jù)基因芯片microRNA表達(dá)譜的檢測(cè)結(jié)果,初步篩選出可能調(diào)節(jié)PPARs的miRNA:miRNA221-3P和miRNA192-3P,RT-PCR檢測(cè)結(jié)果為:與NL組相比,三周齡SL組miRNA221-3P表達(dá)升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);miRNA192-3P表達(dá)降低,但兩組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。九周齡時(shí),SL組miRNA221-3P表達(dá)升高,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。miRNA192-3P表達(dá)降低,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:本課題研究表明,哺乳期營(yíng)養(yǎng)過(guò)�？赡軐�(duì)大鼠體重和血清脂肪酸有長(zhǎng)期影響,引起體內(nèi)糖脂代謝指標(biāo)改變,使得大鼠體內(nèi)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)途徑受損,增加IR發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。通過(guò)對(duì)PPARα和PPARγ脂代謝基因的檢測(cè),以及miRNA221-3p、miRNA192-3p表達(dá)的研究,初步探索miRNA對(duì)PPARα以及PPARγ的調(diào)節(jié)機(jī)制。
【圖文】：

判斷大鼠肥胖是否由于進(jìn)食過(guò)多引起。檢測(cè)內(nèi)臟脂肪并計(jì)算內(nèi)臟哺乳期營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩模型造模情況。獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)分析結(jié)果表明：①三周：與 NL 組相比，，SL 組異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05））②九周：與 NL 組相比，SL 組體重升統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（見(jiàn)表 1-1，圖 1-1）表 1-1 各批次各組大鼠體重變化情況（ ±s）組別體重（g）三周 九周NL 組（n=10）SL 組（n=9）52.71±4.3365.27±9.52*351.51±4413.99±3*表示：在 SL 組與 NL 組的比較中 P<0.05，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

圖 1-2 哺乳期大鼠體重變化趨勢(shì)圖圖 1-3 大鼠三周齡后體重趨勢(shì)圖圖 1-2、1-3 為大鼠從哺乳期體重變化趨勢(shì)圖及三周齡至九周勢(shì)圖，從圖中可看出 SL 組體重持續(xù)增長(zhǎng)，且一直高于 NL 組。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2693801