發(fā)布時間：2020-06-02 08:40

【摘要】：目的1、通過檢測胰島素信號通路蛋白在小鼠胰島β細胞中的表達,從細胞水平探討游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)對小鼠胰島β細胞(MIN6)細胞株自身的胰島素抵抗的作用。2、探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在高FT3引起MIN6細胞自身胰島素抵抗中的作用。方法1、體外傳代培養(yǎng)小鼠胰島β(MIN6)細胞株,取15-25代細胞種于六孔板中,待其培養(yǎng)至融合度80%時,分實驗組(高FT3)與對照組(正常FT3)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑組(高FT3+4-PBA)、胰島素抵抗抑制劑組(高FT3+釩酸鈉),實驗組以20pg/ml的FT3,對照組以5pg/ml FT3,抑制劑組為20pg/ml FT3+1mmol/L4-PBA和20pg/ml FT3+5umol/L釩酸鈉,分別干預MIN6細胞48小時后,運用蛋白質(zhì)印跡(western blot)法檢測IRS-1 ~(Ser307)(Ser307磷酸化位點)、Akt等胰島素信號通路蛋白與PERK、IRE1、ATF6、GRP78等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白,以及CHOP、caspase12等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性凋亡蛋白的表達水平,比較對照組與實驗組、抑制劑組蛋白的表達差異;2、應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)檢測各組上清液中胰島素濃度,比較各組上清液中胰島素濃度是否存在差異。結(jié)果1、高FT3組IRS-1Ser307的表達量明顯高于正常FT3組,Akt表達量則明顯低于正常FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。上清液胰島素測定中,高FT3組上清液胰島素濃度明顯低于正常FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。加胰島素抵抗抑制劑釩酸鈉后,高FT3+釩酸鈉組IRS-1Ser307的表達量明顯低于高FT3組,Akt的表達量則明顯高于高FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。上清液胰島素測定中,高FT3+釩酸鈉組上清液胰島素濃度明顯高于高FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。2、高FT3組PERK、IRE1、ATF6、GRP78等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白表達量均明顯高于正常FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑4-PBA后,高FT3+4-PBA組PERK、IRE1、ATF6、GRP78等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白表達量均明顯低于高FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑4-PBA后,高FT3+4-PBA組IRS-1Ser307的表達量明顯低于高FT3組,Akt表達量則明顯高于高FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑后,高FT3+4-PBA組上清液胰島素濃度明顯高于高FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。3、高FT3組CHOP、caspase12等凋亡相關(guān)蛋白表達量均明顯高于正常FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑后,高FT3+4-PBA組CHOP、caspase12等凋亡相關(guān)蛋白表達量均明顯低于高FT3組,配對t檢驗得P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論1、高FT3可導致MIN6細胞的胰島素信號通路蛋白IRS-1Ser307表達上調(diào),Akt表達下調(diào),并抑制MIN6細胞的胰島素分泌,即高FT3可能引起胰島β細胞的自身胰島素抵抗。2、高FT3可導致MIN6細胞PERK、IRE1、ATF6、GRP78等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白表達上調(diào),加用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑后,PERK、IRE1、ATF6、GRP78等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白表達下調(diào),胰島素信號通路蛋白IRS-1Ser307表達下調(diào)、Akt表達上調(diào),細胞胰島素分泌量上調(diào),即高FT3可能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,并通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激途徑引起胰島細胞自身的胰島素抵抗。3、高FT3可導致MIN6細胞CHOP、caspase12等凋亡相關(guān)蛋白表達上調(diào),通過上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激特異性凋亡蛋白CHOP、Caspase12表達促進MIN6細胞凋亡,參與胰島β細胞的自身胰島素抵抗。
【圖文】：

福建醫(yī)科大學碩士論文驗，P＜0.05 有統(tǒng)計學意義。結(jié)果 各分組目的蛋白相對表達量的比較各分組干預 48 小時后，提取細胞總蛋白，用 Western-blot 檢測各分、Akt 等胰島素信號通路蛋白的表達水平，用 Quantity One 圖像分析軟條帶的灰度值。以 IRS-1Ser307、Akt 蛋白條帶的吸光度與β-actin 條帶的值作為目的蛋白的相對表達量，，以比較各組間蛋白表達的差異。1 正常 FT3 組與高 FT3 組胰島信號通路蛋白表達量的比較

3）高 FT3 組 IRS-1Ser307的表達量明顯高于正常 FT3 組，Akt 的表達量則明顯低于組，通過配對 t 檢驗得到*P<0.05，n=3。2 高 FT3 組與高 FT3+釩酸鈉（胰島素抵抗抑制劑）組胰島素信號通路蛋比較
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1;R581.1

【參考文獻】

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本文編號：2692899