【摘要】：第一部分 TREM2在肥胖致胰島素抵抗小鼠模型附睪脂肪組織中的動態(tài)表達(dá)變化研究目的:髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-2(trigger receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)最早發(fā)現(xiàn)于巨噬細(xì)胞等髓系細(xì)胞,調(diào)控多種生物學(xué)功能。近年來,研究發(fā)現(xiàn)TREM2基因也表達(dá)于成熟的脂肪細(xì)胞。在肥胖動物模型的脂肪組織中,TREM2基因表達(dá)水平顯著升高。眾所周知,脂肪組織重塑在肥胖致胰島素抵抗發(fā)生發(fā)展的病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,而其重塑過程又以對脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量和功能的調(diào)節(jié)最為重要。然而,上述兩種細(xì)胞的TREM2是否參與了脂肪組織的重塑過程,進(jìn)而調(diào)控了肥胖致胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展,尚未見研究報道。本部分研究,旨在通過對6周齡C57BL/6野生型小鼠予以60%脂肪熱能高脂飼料,飼養(yǎng)16周,誘導(dǎo)肥胖致胰島素抵抗小鼠模型,觀察附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TREM2基因表達(dá)水平的動態(tài)變化,并初步探討TREM2基因表達(dá)與脂肪組織重塑發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。研究方法:1.6周齡C57BL/6野生型小鼠隨機(jī)分為高脂組和對照組,分別予以60%脂肪熱能高脂飼料和10%脂肪熱能對照飼料,飼養(yǎng)16周。2.分別于飼養(yǎng)第0、4、8、12和16周取兩組小鼠的附睪脂肪組織,采用差速離心的方法,分離純化脂肪細(xì)胞;采用貼壁培養(yǎng)的方法,獲取附睪脂肪組織中的巨噬細(xì)胞。采用實時熒光定量PCR反應(yīng)測定兩組小鼠附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TREM2基因的動態(tài)表達(dá)水平。研究結(jié)果:1.高脂組小鼠飼養(yǎng)第4、8、12和16周體重顯著增加(p0.0001),附睪脂肪組織重量顯著增加(p0.0001);飼養(yǎng)第8、12和16周肝臟重量顯著增加(p0.01)。自飼養(yǎng)第12周開始,高脂組小鼠附睪脂肪組織開始出現(xiàn)脂肪細(xì)胞肥大、脂肪細(xì)胞壞死,巨噬細(xì)胞浸潤,冠狀結(jié)構(gòu)形成等典型的脂肪組織重塑病理學(xué)特征;同時小鼠肝臟發(fā)生脂肪變性,出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、肝細(xì)胞水腫、炎性細(xì)胞浸潤和炎性灶形成等病理學(xué)表現(xiàn),提示異位脂質(zhì)沉積。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),飼養(yǎng)第12周,高脂組小鼠空腹血糖水平顯著升高(4.92±0.32mmol/L vs.14.17±1.54mmol/L,p0.01),對胰島素敏感性顯著下降(p0.0001)。2.飼養(yǎng)第12、16周,高脂組小鼠附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞TREM2基因表達(dá)水平顯著升高(p0.01);飼養(yǎng)第12周,高脂組小鼠巨噬細(xì)胞TREM2基因表達(dá)水平顯著高于對照組(p0.0001)。研究結(jié)論:1.本研究采用高脂飼養(yǎng)成功構(gòu)建肥胖致胰島素抵抗小鼠模型,飼養(yǎng)第12周,小鼠附睪脂肪組織開始出現(xiàn)典型的脂肪組織重塑病理學(xué)特征。2.飼養(yǎng)第12周,高脂組小鼠附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TREM2基因表達(dá)水平顯著升高。第二部分 TREM2在肥胖致胰島素抵抗小鼠模型中的作用和機(jī)制研究研究目的:第一部分研究發(fā)現(xiàn),高脂飼養(yǎng)誘導(dǎo)的肥胖致胰島素抵抗小鼠模型附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TREM2基因表達(dá)水平升高,于飼養(yǎng)第12周達(dá)到最大值,同時小鼠附睪脂肪組織開始表現(xiàn)出典型的脂肪組織重塑病理學(xué)特征。上述結(jié)果提示,在肥胖致胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展中,脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的TREM2可能通過調(diào)控脂肪組織重塑發(fā)揮重要作用。因此,本部分研究在TREM2全身敲除小鼠(TREM2-/-小鼠)中,采用高脂飼養(yǎng)構(gòu)建肥胖致胰島素抵抗模型,證實該假設(shè),從而闡明TREM2在肥胖致胰島素抵抗病理過程中的作用和可能機(jī)制。研究方法:1.將6周齡C57BL/6野生型和TREM2-/-小鼠配對后隨機(jī)分為高脂組和對照組,分別予以60%脂肪熱能高脂飼料和10%脂肪熱能對照飼料,飼養(yǎng)12周,構(gòu)建肥胖致胰島素抵抗小鼠模型。飼養(yǎng)期間,觀察小鼠的體重變化和攝食量高低。2.飼養(yǎng)12周后,稱量小鼠附睪脂肪組織及肝臟的重量,并計算其所占體重的比例;對脂肪組織和肝臟進(jìn)行HE染色,評估其病理學(xué)改變。測定小鼠空腹血糖、游離脂肪酸、甘油三酯和膽固醇,評估其糖脂代謝水平。對小鼠進(jìn)行葡萄糖耐受試驗和胰島素耐受試驗,并采用Western blot檢測附睪脂肪組織胰島素信號通路的活化水平,評估其胰島素抵抗程度。3.采用ImageJ圖像分析軟件測量高脂組小鼠附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞的截面積大小,并統(tǒng)計不同大小脂肪細(xì)胞在附睪脂肪組織中的分布情況。對附睪脂肪組織進(jìn)行脂滴包被蛋白(Perilipin)染色,評估脂肪細(xì)胞壞死的情況。對附睪脂肪組織進(jìn)行F4/80染色,并結(jié)合流式細(xì)胞分析,評估脂肪組織中巨噬細(xì)胞的數(shù)量和表型的變化。采用實時熒光定量PCR反應(yīng)檢測小鼠附睪脂肪組織、其脂肪細(xì)胞MCP-1的表達(dá)水平,通過Western blot檢測小鼠脂肪細(xì)胞MCP-1的蛋白水平,并通過ELISA檢測小鼠循環(huán)中MCP-1水平。采用實時熒光定量PCR反應(yīng)測定兩組小鼠附睪脂肪組織及其巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS的表達(dá)水平。研究結(jié)果:1.對照飼料飼養(yǎng)下,與野生型小鼠相比,TREM2-/-小鼠體重、附睪脂肪組織和肝臟病理學(xué)特征以及胰島素敏感性無顯著差異。高脂飼料飼養(yǎng)下,與野生型小鼠相比,TREM2-/-小鼠體重顯著增加(p0.01),肝臟脂肪變性程度顯著加重,空腹血糖水平顯著升高(14.33±0.90mmol/L vs.17.49±1.19mmol/L,p0.05),胰島素敏感性顯著下降(p0.01)。2.高脂飼養(yǎng)12周后,TREM2-/-小鼠附睪脂肪組織重量顯著減輕(2.38±0.09g vs.1.99±0.09g,p0.01),所占體重比例顯著降低(5.23±0.23%vs.4.15±0.20%,p0.01)。TREM2-/-小鼠附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞截面積顯著增大(2.1±0.1 ×104μm2 vs 5.0±0.2×104μm2，，p0.0001);且小體積脂肪細(xì)胞所占比例降低,大體積脂肪細(xì)胞所占比例升高。TREM2-/-小鼠附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞壞死比例顯著增加(p0.001),且壞死脂肪細(xì)胞周圍無巨噬細(xì)胞浸潤,冠狀結(jié)構(gòu)基本消失。3.高脂飼養(yǎng)12周后,TREM2-/-小鼠附睪脂肪組織中脂肪細(xì)胞MCP-1基因的表達(dá)水平顯著降低(p0.01),蛋白水平顯著降低;脂肪組織整體MCP-1基因的表達(dá)水平顯著降低(p0.01);TREM2-/-小鼠循環(huán)中MCP-1水平顯著降低(176.8±13.9pg/ml vs.126.1±7.0pg/ml,p0.01)。4.高脂飼養(yǎng)12周后,TREM2-/-小鼠附睪脂肪組織中巨噬細(xì)胞所占比例顯著降低(56.7±2.8%vs.48.1±1.7%,p0.05);數(shù)量顯著減少(每克脂肪組織含巨噬細(xì)胞6.57±0.42×105 2.85±0.58×105,p0.001)。TREM2-/-小鼠附睪脂肪組織中F4/80+CD11c+巨噬細(xì)胞(即募集的巨噬細(xì)胞)比例顯著降低(36.5±3.1%vs.7.8±0.6%,p0.001);F4/80+CD206+巨噬細(xì)胞(即原駐的巨噬細(xì)胞)比例顯著升高(36.7±2.6%vs.43.1±1.3%,p0.05)。5.高脂飼養(yǎng)12周后,與野生型小鼠相比,TREM2-/-小鼠附睪脂肪組織及其巨噬細(xì)胞IL-1β、IL-6和iNOS的表達(dá)水平顯著升高(p0.05)。研究結(jié)論:1.TREM2調(diào)控了高脂飼養(yǎng)下小鼠附睪脂肪組織的重塑過程。2.可能機(jī)制如下:1)TREM2促進(jìn)脂肪細(xì)胞增殖,抑制脂肪細(xì)胞肥大和脂肪細(xì)胞壞死;2)TREM2誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞合成MCP-1,募集F4/80+CD11c+巨噬細(xì)胞浸潤,對壞死的脂肪細(xì)胞進(jìn)行包裹隔離和有效清理;3)TREM2減少巨噬細(xì)胞炎性介質(zhì)釋放。通過上述途徑,TREM2調(diào)控脂肪組織重塑,降低了脂肪組織整體的炎癥反應(yīng)。3.TREM2在肥胖致胰島素抵抗小鼠模型中發(fā)揮了一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R589.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 姜金鵬;張俊杰;秦鑒;;脂肪組織功能障礙在肥胖相關(guān)胰島素抵抗中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年06期

2 張雨;李振山;;心周脂肪組織與冠狀動脈粥樣硬化相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2014年13期

3 梁忠泉;袁昌隆;張寶賀;;脂肪組織的制片技巧[J];中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué);2009年06期

4 程舸;王開富;馮宗忱;黃郁霆;;實驗性糖尿病大鼠脂肪組織環(huán)腺苷酸和血漿脂質(zhì)的變化[J];廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1989年01期

5 李奕平;楊瑩;;飽受爭議的脂肪組織[J];糖尿病天地(臨床);2015年07期

6 馬本江,潘尚哈,林春艷,畢莉,孫蕾,常東,劉小民;脂肪組織總RNA的快速提取[J];生物技術(shù);1998年06期

7 ;胖孩子脂肪組織6歲時已現(xiàn)病理變化[J];健康博覽;2015年03期

8 吳浩俊;梁杰;羅少軍;;血管內(nèi)皮生長因子在脂肪組織移植中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年02期

9 段祥;段巧艷;張煥相;;干細(xì)胞在脂肪組織工程中的應(yīng)用[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年37期

10 李青;馬鈺;;脂肪組織功能新發(fā)現(xiàn)[J];中華病理學(xué)雜志;2006年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳福偉;楊國宇;李宏基;郭豫杰;魯維飛;;小鼠脂肪組織中孤啡肽及其受體基因表達(dá)的研究[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

2 鄒曉防;;脂肪組織與創(chuàng)面愈合[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

3 高萍;朱曉琳;李強(qiáng);孫玉倩;孫海云;毛春梅;李廣田;;動脈粥樣硬化患者脂肪組織C-反應(yīng)蛋白與脂聯(lián)素mRNA表達(dá)關(guān)系的研究[A];2009中國醫(yī)師協(xié)會內(nèi)分泌代謝科醫(yī)師分會年會論文匯編[C];2009年

4 何更生;J.M.Bruun;A.S.Lihn;S.B.Pedersen;B.Richeksen;;糖對脂肪組織中纖溶酶原激活物抑制-1(PAI-1)的調(diào)節(jié)作用[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第九次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

5 趙會娟;尹曉琳;王園園;劉慧芳;孟明;陳冬志;;NKT細(xì)胞在肥胖脂肪組織慢性炎癥中的作用[A];第十二屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2017年

6 孫q

本文編號：2684247