【摘要】：背景:痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(GA)是由于尿酸鹽晶體沉積于關(guān)節(jié)腔內(nèi)而誘發(fā)的急性炎癥反應(yīng),伴隨大量炎癥細(xì)胞的浸潤和多種炎癥因子的表達(dá)。已發(fā)現(xiàn)單核/巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞是參與GA發(fā)病的主要免疫細(xì)胞,IL-1β是其中的關(guān)鍵因子,然而GA中的炎癥調(diào)控機(jī)制尚未完全明確。Gαq是Gq蛋白的α功能亞單位,參與多種免疫細(xì)胞的功能調(diào)控,而Gq是否參與痛風(fēng)發(fā)病尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。方法:本課題首先收集GA患者及健康人(HC)外周血標(biāo)本,RT-PCR法檢測(cè)其WBC中GNAQ的表達(dá),并分析GNAQ表達(dá)量與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。接著,通過小鼠急性痛風(fēng)氣囊模型驗(yàn)證Gnaq參與MSU誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。進(jìn)一步,通過體外培養(yǎng)骨髓巨噬細(xì)胞(BMDM),研究Gαq是否調(diào)控BMDM中炎癥因子的表達(dá)、NLRP3信號(hào)通路及BMDM的吞噬功能。結(jié)果:GA患者WBC中GNAQ基因的表達(dá)顯著低于正常對(duì)照,且GA患者GNAQ基因的表達(dá)水平與其臨床指標(biāo)UA成負(fù)相關(guān)性。在小鼠急性痛風(fēng)氣囊模型中發(fā)現(xiàn),Gnaq-/-骨髓嵌合鼠氣囊內(nèi)MSU募集的炎性細(xì)胞數(shù)目及誘導(dǎo)的細(xì)胞因子(IL-1β,IL-6,CXCL1)表達(dá)均顯著高于WT骨髓嵌合鼠。在體外培養(yǎng)的骨髓巨噬細(xì)胞,我們發(fā)現(xiàn)MSU刺激后Gnaq-/-BMDM分泌的IL-1β等炎癥因子明顯高于WT BMDM,并且其吞噬功能、ROS的表達(dá)及NLRP3信號(hào)通路的活化也高于WTBMDM。結(jié)論:臨床數(shù)據(jù)及體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Gαq通過負(fù)調(diào)控巨噬細(xì)胞炎癥因子的分泌、吞噬功能、ROS的表達(dá)和NLRP3信號(hào)通路而參與MSU誘導(dǎo)的炎癥。本課題初步探討了MSU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的炎癥過程中Gαq發(fā)揮的調(diào)控作用,補(bǔ)充了痛風(fēng)的炎癥調(diào)控機(jī)制,為痛風(fēng)研究及治療提供新的方向。
【圖文】：

別進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)和正式實(shí)驗(yàn)。小鼠ＤＮＡ鑒定的引物如表１０，其中引物Ｇａｑｌ和Ｇａｑ２擴(kuò)增逡逑出是的７５０ｂｐ產(chǎn)物，引物Ｇａｑ２和Ｇｔｘｑ３擴(kuò)增出是的４００ｂｐ產(chǎn)物，則根據(jù)ＰＣＲ產(chǎn)物條帶的逡逑數(shù)目及分子量可判斷小鼠基因型。如圖３所示，通過電泳將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分離，然后使用逡逑儀器進(jìn)行成像，只有７５０ｂｐ處條帶的樣本基因型為型，只有４００ｂｐ處條帶的樣本逡逑基因型為型，兩個(gè)條帶都有的樣本基因型為叫＋／－型。逡逑表１０．邋ＰＣＲ鑒定小鼠基因型所需的引物序列邐＿逡逑引物名稱邐序列逡逑Ｇａｑｌ邐ＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＡＧＧＡＣＡＴＧＴＡＴＧＣ逡逑Ｇａｑ２邐ＴＴＣＡＡＡＧＴＡＴＣＡＣＡＣＴＣＡＣＡＴＣＡＣＡＧ逡逑Ｇａｑ３邐ＡＧＧＡＴＣＴＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡ逡逑圖３．小鼠基因型鑒定的結(jié)果逡逑３８逡逑

圖６．檢測(cè)氣囊內(nèi)炎癥反應(yīng)的高峰時(shí)間點(diǎn)。氣囊造模第７天時(shí)，向氣囊內(nèi)注射ＭＳＵ逡逑３ｍｇ／ｌｍＬ，在束ＩＪ激的３ｈ、６ｈ、９ｈ、１２ｈ時(shí)間點(diǎn)處死小鼠，回收氣囊灌洗液，分別檢測(cè)灌洗逡逑液中的細(xì)胞總數(shù)和灌洗液上清中ＩＬ－１｜３的含量。Ａ．運(yùn)用流式儀器的計(jì)數(shù)功能統(tǒng)計(jì)氣囊中逡逑募集細(xì)胞的總數(shù)，募集細(xì)胞的高峰時(shí)間點(diǎn)為９ｈ邋（ｎ＝３）。Ｂ．Ｅｌｉｓａ法檢測(cè)氣囊上清中ＩＬ－ｌｐ逡逑的表達(dá)，ＩＬ－ｌｐ的高峰時(shí)間點(diǎn)為６ｈ邋（ｎ＝３）。逡逑本次研究選取的模型為小鼠氣囊模型，其特點(diǎn)為打藥簡便、回收細(xì)胞方便快捷。氣囊中的逡逑免疫細(xì)胞主要為中性粒細(xì)胞，并且這些細(xì)胞可檢測(cè)到尿酸鹽結(jié)晶的吞噬，與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎逡逑的臨床特征類似［１３］。氣囊模型的主要制備過程為：第１天，通過皮下注射５ｍＬ無菌空氣，逡逑在小鼠背部制成體積適當(dāng)?shù)臒o菌腔體（如圖５）；第３天，氣囊中補(bǔ)加３ｍＬ無菌空氣；逡逑４０逡逑
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R589.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 武東;趙金霞;孫琳;劉湘源;;痛風(fēng)炎癥機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2014年02期

2 錢伯初;史紅;鄭曉亮;;尿酸鈉結(jié)晶誘導(dǎo)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

3 王紅梅;楊中華;張明;王易;;急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的炎癥機(jī)制研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2005年03期

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本文編號(hào)：2678821