【摘要】：研究背景和目的:近二十幾年來肥胖發(fā)病率在全球迅猛增長,肥胖引發(fā)的眾多疾病如2型糖尿病的發(fā)病率也在不斷攀升,這給個(gè)人、家庭和社會(huì)帶來了沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。營養(yǎng)過剩和缺乏運(yùn)動(dòng)是肥胖及其相關(guān)疾病的兩個(gè)重要誘因。高脂膳食不僅可導(dǎo)致肥胖而且可引發(fā)胰島素抵抗等;運(yùn)動(dòng)則改善高脂膳食誘導(dǎo)的胰島素抵抗。了解骨骼肌胰島素抵抗機(jī)制及運(yùn)動(dòng)干預(yù)的生理基礎(chǔ),對(duì)尋找肥胖或肥胖相關(guān)疾病防治的藥理靶位點(diǎn)具有重要意義。研究表明m TORC1持續(xù)激活及慢性低度炎癥在肥胖誘導(dǎo)的胰島素抵抗中起了重要作用,但m TORC1與炎癥相互關(guān)系并不清楚。運(yùn)動(dòng)改善高脂膳食誘導(dǎo)的骨骼肌胰島素抵抗,機(jī)制也不清楚。本研究擬利用不同細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),觀察不同細(xì)胞NF-κB活性及其相關(guān)信號(hào),從細(xì)胞層面闡明高脂膳食對(duì)NF-κB信號(hào)通路調(diào)節(jié)以及炎癥信號(hào)的影響,雷帕霉素對(duì)高脂誘導(dǎo)的炎癥因子的影響。本研究有助于揭示胰島素抵抗新機(jī)制及運(yùn)動(dòng)干預(yù)的生理基礎(chǔ),為肥胖誘導(dǎo)的胰島素抵抗防治提供新思路。研究對(duì)象與方法:首先體外培養(yǎng)大鼠骨骼肌L6細(xì)胞、大鼠原代脂肪細(xì)胞、肝臟BRL-3A細(xì)胞,分別分化為成熟的細(xì)胞后,(1)然后將分化的骨骼肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝臟細(xì)胞置于濃度為0.5m M和0.2m M的軟脂酸孵育液中孵育,孵育在0.2m M軟脂酸中的細(xì)胞分別在0h,1h,3h,6h,12h,24h進(jìn)行收樣,用于蛋白定量和熒光PCR定量。(2)選取0.5m M濃度軟脂酸孵育液中孵育的骨骼肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞再分別分為兩組:高脂組、高脂+雷帕霉素組、并在0h,1h,3h,6h,12h進(jìn)行收樣,分別用于蛋白定量和熒光PCR定量等。研究結(jié)果:(1)在孵育不同濃度軟脂酸后,骨骼肌細(xì)胞中P65m RNA、IL6m RNA、TNF-αm RNA均上調(diào),其中Rel Bm RNA僅在0.5m M濃度軟脂酸孵育后有上調(diào),蛋白P65、P-P65、Rel B、P-Rel B、IL-6、TNF-α均上調(diào);脂肪細(xì)胞中,P65m RNA、Rel Bm RNA、IL6m RNA、TNF-αm RNA均上調(diào),蛋白P-P65、P-Rel B、IL6、TNF-α均上調(diào);肝細(xì)胞中P65m RNA、Rel Bm RNA、IL6m RNA、TNF-αm RNA均上調(diào),蛋白P-P65、IL6、TNF-α均上調(diào);且上調(diào)時(shí)我們能觀察到0.5m M濃度軟脂酸孵育后比在0.2m M濃度軟脂酸孵育后各指標(biāo)能更早地達(dá)到峰值水平。(P0.05)(2)用雷帕霉素干預(yù)0.5m M軟脂酸孵育的細(xì)胞后,骨骼肌細(xì)胞中P65m RNA、Rel Bm RNA、IL6m RNA、TNF-αm RNA均上調(diào),蛋白S6、P-S6表達(dá)降低,P65、P-P65、Rel B、P-Rel B、IL-6、TNF-α均增加(P0.05);脂肪細(xì)胞中中P65m RNA、Rel Bm RNA、IL6m RNA、TNF-αm RNA均降低,蛋白S6、P-S6表達(dá)降低,P-P65、Rel B、P-Rel B、IL-6、TNF-α均降低(P0.05);肝細(xì)胞中基因指標(biāo)沒有顯著性變化(P0.05),蛋白S6、P-S6表達(dá)降低,P-P65、IL-6、TNF-α表達(dá)增加(P0.05)。結(jié)論:1.軟脂酸可促進(jìn)骨骼肌細(xì)胞,脂肪細(xì)胞,肝細(xì)胞中NF-κB通路的激活,引起炎癥反應(yīng),同時(shí)NF-κB信號(hào)通路的激活和炎癥因子IL6、TNF-α的上調(diào)與軟脂酸有著相關(guān)的時(shí)間和劑量依賴性關(guān)系。2.雷帕霉素在不同組織細(xì)胞中的作用機(jī)制不同,在骨骼肌中進(jìn)一步惡化了高脂引起的炎癥反應(yīng),在脂肪細(xì)胞中卻能抑制高脂引起的炎癥因子的分泌,在肝臟中一定程度上惡化了炎癥反應(yīng),并可能引發(fā)胰島素抵抗。
【圖文】：

圖 1 分化的 L6 細(xì)胞在分別給予 0.2mM 和 0.5mM Palmitate acid 后，P65、RelB、IL6、TNF-α的 PCR 結(jié)果Western blotting 結(jié)果見圖 6 和圖 2，在骨骼肌細(xì)胞中，孵育在 0.5mM PA 中，P65、P-P65、RelB、IL6 蛋白表達(dá)水平 6h 與 0h 相比增加顯著（p＜0.05），P-RelB、TNF-α蛋白表達(dá)水平 12h 與 0h 相比增加顯著（p＜0.05）。而孵育在 0.2mM PA中，P65、P-P65、RelB、IL6 蛋白表達(dá)水平 12h 與 0h 相比增加顯著（p＜0.05），P-RelB、TNF-α蛋白表達(dá)水平 24h 與 0h 相比增加顯著（p＜0.05）。孵育在 0.5mM軟脂酸中與在 0.2mM 軟脂酸中相比，P65 蛋白表達(dá)水平在 3h、6h 有顯著性差異，RelB 蛋白在 1h，6h 有顯著性差異，P-P65、IL6 蛋白表達(dá)水平在 6h 有顯著性差異，，P-RelB、TNF-α蛋白表達(dá)水平在 12h 有顯著性差異（p＜0.05）。

圖 2 分化的 L6 細(xì)胞在分別給予 0.2mM 和 0.5mM Palmitate acid 后，P65、RelB、IL6、TNF-α的 Western Blotting 結(jié)果4.1.2 Rapamycin 對(duì)不同時(shí)間的軟脂酸孵育 L6 細(xì)胞時(shí) NF-κB 軸相關(guān)信號(hào)影響熒光定量 PCR 結(jié)果見表 7 和圖 3，在骨骼肌細(xì)胞中，0.5mM 軟脂酸（PA）和雷帕霉素(rapamycin)共同處理過的細(xì)胞與僅僅用 0.5mM PA 處理過的細(xì)胞相比，p65、RelB mRNA 水平在 6h 顯著增加（p＜0.05），IL6、TNF-αmRNA 水平在 3h，6h 時(shí)增加顯著（p＜0.05）。
【學(xué)位授予單位】：廣州體育學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R589.2

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