發(fā)布時間：2020-05-14 05:33

【摘要】：實(shí)驗(yàn)背景和目的:骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)是全世界最為常見的系統(tǒng)性疾病之一,而且骨質(zhì)疏松骨缺損的修復(fù)也一直是困擾口腔醫(yī)生的難題。對于骨質(zhì)疏松癥的治療,常見的全身藥物治療治療效果較慢,并且還有許多的藥物副作用。所以在全身治療的方法之外,如何通過局部治療來促進(jìn)骨質(zhì)疏松患者牙槽骨缺損的恢復(fù)已經(jīng)成為如今的研究熱點(diǎn)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)作為現(xiàn)今骨組織工程常用的種子細(xì)胞,已經(jīng)證實(shí)對骨缺損具有促進(jìn)愈合作用;而酪蛋白激酶2-相互作用蛋白1(Casein kinase 2-interacting protein-1,CKIP-1)是新近發(fā)現(xiàn)的負(fù)調(diào)控骨形成的重要因子。本實(shí)驗(yàn)將探究CKIP-1在骨質(zhì)疏松大鼠和正常大鼠牙槽骨的表達(dá)差異,以及CKIP-1修飾的BMSCs對骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損的修復(fù)作用。實(shí)驗(yàn)方法:(1)OP模型建立與驗(yàn)證:20只10周齡雌性SD大鼠隨機(jī)分為兩組,OP組:以70mg/(kg·d)的維甲酸連續(xù)灌胃21天;正常組:以同體積雙蒸水連續(xù)灌胃21天;停止灌胃第1天和30天分別對大鼠進(jìn)行麻醉后骨密度檢測;停止灌胃30天后處死所有大鼠,取股骨進(jìn)行HE染色驗(yàn)證OP模型,上頜骨進(jìn)行免疫組化染色觀察兩組大鼠體內(nèi)CKIP-1的表達(dá)差異。(2)CKIP-1基因修飾的BMSCs的培養(yǎng)鑒定:1只1周齡SD乳鼠處死,分離培養(yǎng)BMSCs。再對所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行增殖能力、成骨能力、成脂能力和免疫表型流式鑒定。通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方法修飾BMSCs內(nèi)CKIP-1的表達(dá),RT-PCR鑒定CKIP-1的表達(dá)是否降低。(3)體內(nèi)骨缺損修復(fù)實(shí)驗(yàn):44只SD大鼠隨機(jī)分為4組,1)OP+BMSCs/CKIP-1組:22只骨質(zhì)疏松大鼠右側(cè)骨缺損內(nèi)植入慢病毒轉(zhuǎn)染沉默CKIP-1的BMSCs與明膠海綿的復(fù)合體;2)OP+BMSCs組:22只骨質(zhì)疏松大鼠左側(cè)骨缺損植入空載體轉(zhuǎn)染的BMSCs與明膠海綿的復(fù)合體:3)OP組:另外11只骨質(zhì)疏松大鼠雙側(cè)骨缺損內(nèi)植入明膠海綿;4)對照組:11只正常大鼠雙側(cè)植入明膠海綿。術(shù)后恢復(fù)30天后處死所有大鼠,取上頜骨分別進(jìn)行HE染色組織學(xué)評分和新生骨面積百分比計(jì)算骨缺損恢復(fù)情況,PCR檢測各組CKIP-1、ALP、OCN的mRNA相對表達(dá)量,免疫組化染色觀察ALP、OCN的陽性表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)維甲酸灌胃致骨質(zhì)疏松模型成功建立,停止灌胃30天后模型依然成立;OP組CKIP-1的mRNA表達(dá)量比對照組高。(2)BMSCs培養(yǎng)鑒定成功,并且通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式沉默細(xì)胞CKIP-1的表達(dá)。(3)術(shù)后30天,OP+BMSCs/CKIP-1組骨缺損恢復(fù)情況與正常組相近,比OP+BMSCs組和OP組都好,成功促進(jìn)骨質(zhì)疏松骨缺損的愈合;PCR和免疫組化證明OP+BMSCs/CKIP-1組成骨相關(guān)的基因蛋白表達(dá)更多,成骨效能更高。結(jié)論:骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨部位CKIP-1表達(dá)量較正常大鼠更多。CKIP-1轉(zhuǎn)染后的BMSCs局部移植對骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損具有促進(jìn)修復(fù)的作用,并且比單純的BMSCs修復(fù)作用更佳,CKIP-1在其中發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R580;R78

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本文編號：2662873