【摘要】：目的:1、通過(guò)給予高果糖飲食建立大鼠代謝異常模型,探究大鼠腸道菌群變化及腸道菌群在高果糖飲食致機(jī)體代謝紊亂中的作用及機(jī)制。2、研究雙歧桿菌干預(yù)對(duì)大鼠腸道菌群失調(diào)及代謝紊亂的影響。方法:30只SD雄性大鼠隨機(jī)平均分作三組:正常對(duì)照組(NC組)、高果糖組(HFD組)、雙歧桿菌組(Bif組)。NC組,標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料+自來(lái)水喂養(yǎng);HFD組,標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料+10%果糖水喂養(yǎng);Bif組,標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料+10%果糖水喂養(yǎng)及雙歧桿菌水(1ml/d,1×10~9cfu/ml)灌胃。每周監(jiān)測(cè)大鼠體重。16周末收集各組大鼠糞便,置于無(wú)菌標(biāo)本試管中并快速凍存于-80℃冰箱。16周末大鼠禁食12h,鼠尾靜脈采血檢測(cè)血糖變化。動(dòng)物乙醚麻醉固定,腹主動(dòng)脈采血,4℃離心10min(3500rpm/min)取上清,分裝,-40℃凍存。剝離部分肝臟,4%多聚甲醛固定24 h,HE染色觀察肝臟組織學(xué)變化。1、大鼠體重及空腹血糖的測(cè)定每周監(jiān)測(cè)記錄大鼠體重變化,16周末經(jīng)鼠尾靜脈采血,采用快速血糖儀(羅氏活力型)檢測(cè)大鼠空腹血糖水平。2、大鼠血漿生化指標(biāo)的測(cè)定采用酶法測(cè)定血漿肝酶(ALT、AST)及TG含量,鱟試劑法測(cè)定血漿LPS水平,采用ELISA法測(cè)定TNF-α含量。3、大鼠糖代謝指標(biāo)的測(cè)定采用ELISA法測(cè)定血漿空腹胰島素水平,并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR),公式:HOMA-IR=FINS(空腹胰島素,EU/ml)×FBG(空腹血糖,mmol/l)/22.5。4、大鼠肝組織病理學(xué)檢測(cè)剝離部分大鼠肝臟組織,4%多聚甲醛固定過(guò)夜,沖洗去除殘液,將修整規(guī)則部分行常規(guī)石蠟包埋,制成3μm厚度的切片,行HE染色,10倍光鏡觀察肝臟組織學(xué)變化。5、糞便三種菌屬相對(duì)豐度的測(cè)定提取各組動(dòng)物糞便總DNA,運(yùn)用Real Time PCR技術(shù)檢測(cè)并計(jì)算果糖飲食及雙歧桿菌干預(yù)下各組大鼠糞便中擬桿菌屬、乳桿菌屬和梭桿菌屬三種菌屬占總菌的相對(duì)表達(dá)量。計(jì)算公式為:相對(duì)表達(dá)量=2^-[~(CT~(目的基因)-CT~(內(nèi)參基因)處理組)-~(CT~(目的基因)-CT~(內(nèi)參基因)對(duì)照組)]。結(jié)果:1、體重監(jiān)測(cè)結(jié)果實(shí)驗(yàn)期間,各組大鼠生長(zhǎng)正常,僅1只正常組大鼠脫組。從第7周開始,HFD組和Bif組體重增長(zhǎng)速度高于NC組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。從第13周開始,Bif組體重增長(zhǎng)速度低于HFD組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、血漿生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果與NC組比較,HFD組血漿肝酶、TG、LPS及TNF-α水平升高,差異均具有顯著性(P0.01)。與HFD組比較,Bif組血漿肝酶、LPS、TG及TNF-α降低,差異均具有顯著性(P0.01)。3、糖代謝指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果HFD組FBG、FINS及HOMA-IR水平較NC組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Bif組上述指標(biāo)較HFD組減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。血漿LPS水平與HOMA-IR呈正相關(guān)(r=0.897,P0.01)。4、肝組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果NC組肝臟呈暗紅色,無(wú)脂肪堆積,光鏡下可見(jiàn)放射狀排列的肝索;HFD組肝臟體積增大,肉眼可見(jiàn)脂肪堆積,呈淡黃色,邊緣鈍圓,鏡下可見(jiàn)胞內(nèi)有脂滴空泡;Bif組胞內(nèi)脂滴空泡大小及數(shù)量較HFD組均減小。5、腸道菌屬豐度的檢測(cè)結(jié)果與NC組比較,HFD組的擬桿菌屬、乳桿菌屬豐度降低,梭桿菌屬豐度升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Bif組擬桿菌屬、乳桿菌屬豐度較HFD組增加,梭桿菌屬豐度減低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。LPS水平與各組擬桿菌屬相對(duì)豐度無(wú)直接相關(guān)性(r=-0.053,P0.05),LPS水平與各組乳桿菌屬相對(duì)豐度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.381,P0.05),與梭桿菌屬相對(duì)豐度呈正相關(guān)(r=0.882,P0.01)。結(jié)論:1、高果糖飲食可引起大鼠腸道內(nèi)菌屬的失調(diào),并且腸道菌屬可通過(guò)炎癥機(jī)制參與機(jī)體代謝紊亂的發(fā)生。2、適量補(bǔ)充雙歧桿菌可調(diào)節(jié)高果糖飲食引起的腸道菌屬失調(diào),對(duì)動(dòng)物的代謝紊亂發(fā)揮改善作用。
【圖文】：

檢測(cè)結(jié)果，HFD 組 FBG、FINS 及 HOMA-IR 較 NC 組升高Bif 組 FBG、FINS 及 HOMA-IR 低于 HFD 組，S 水平與 HOMA-IR 呈正相關(guān)（r=0.897，P<0.01表 2-2 大鼠腹血糖、胰島素及 HOMA-IR 結(jié)果( x±SD. n = 10)FINS(mU/L) FBG(mmol/L) 19.90±1.78 4.02±0.68 27.70±4.98#7.67±0.36#21.70±1.68*5.06±0.94*P<0.01；與 HFD 組相比，*P<0.01

圖 2-2 血漿 LPS 水平與 HOMA-IR 的相關(guān)性分析圖2.4 肝組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果圖2-3中，NC組肝臟呈暗紅色，無(wú)油膩感，，鏡下可見(jiàn)肝索呈放射狀排列。HFD組肝臟體積增大，肉眼可見(jiàn)脂肪堆積，呈淡黃色，邊緣鈍圓，鏡下可見(jiàn)胞內(nèi)有脂滴空泡。Bif 組細(xì)胞內(nèi)脂滴空泡大小和數(shù)量較HFD組均減小。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R589

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2662634