【摘要】：目的:研究PI3K信號(hào)通路在氟中毒大鼠肝臟組織中表達(dá)以及LY294002抑制PI3K信號(hào)通路的影響,探討PI3K信號(hào)通路對(duì)氟中毒大鼠肝臟損傷的作用機(jī)制及意義。方法:SD大鼠48只,按體重隨機(jī)分4組,每組12只,對(duì)照組:常規(guī)飼料(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供玉米含氟量為1.6mg/kg,飼料中含氟量為1.5mg/kg);氟中毒組:飼以取自病區(qū)的玉米用前加配料并加工制成條狀喂養(yǎng)(加工后的含氟量為10mg/kg);阻斷劑組:氟中毒大鼠飼料同前,處死動(dòng)物前1周尾靜脈注射阻斷劑LY294002,持續(xù)三周;阻斷對(duì)照組:氟中毒大鼠飼料同前,處死動(dòng)物前1周尾靜脈注射阻斷劑稀釋液PBS。觀察大鼠氟斑牙的發(fā)生情況,氟離子電極法檢測(cè)尿氟、骨氟含量;自動(dòng)血生化分析儀檢測(cè)大鼠肝功能;光鏡觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)改變;免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)、Western blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)分別檢測(cè)肝組織中PI3K、Akt1蛋白及其m RNA的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定肝組織細(xì)胞凋亡及胞內(nèi)鈣離子濃度。結(jié)果:1、氟中毒組、阻斷對(duì)照組氟斑牙的發(fā)生率增加,且骨氟、尿氟的含量較對(duì)照組明顯增高((P0.05)),而阻斷劑組大鼠骨氟、尿氟含量較對(duì)照組的差異不明顯,表明慢性氟中毒動(dòng)物模型建立成功。2、與正常對(duì)照組相比,氟中毒組和阻斷對(duì)照組中ALT和AST活性升高,而TP和ALB活性降低;而與阻斷組相比較,氟中毒組和阻斷劑對(duì)照組ALT和AST活性降低,而TP和ALB活性升高。表明氟中毒大鼠肝臟功能有損傷。病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)氟中毒大鼠肝臟損傷不明顯。3、與對(duì)照組相比,氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組肝組織中PI3K、Akt1蛋白及其m RNA的表達(dá)升高,阻斷組與氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組比較,其表達(dá)均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、氟中毒大鼠肝細(xì)胞凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)比對(duì)照組及阻斷劑組增多;阻斷劑組凋亡細(xì)胞較正常對(duì)照組略微增多;氟中毒組與阻斷對(duì)照組無(wú)明顯差異。氟中毒組肝細(xì)胞總凋亡率增加,阻斷劑組凋亡細(xì)胞較氟中毒組減少。除對(duì)照組和阻斷劑組、氟中毒組與阻斷劑對(duì)照組之間比較無(wú)明顯差異外,其余各組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、氟中毒組及阻斷對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度有明顯增強(qiáng);除對(duì)照組和阻斷劑組、氟中毒組與阻斷劑對(duì)照組之間比較無(wú)顯著差異外,其余組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論氟可以激活大鼠肝組織PI3K-Akt信號(hào)通路,LY294002則抑制PI3K-Akt信號(hào)通路的激活,表明PI3K-Akt信號(hào)通路可能參與氟中毒是引起肝臟損傷發(fā)病機(jī)制的環(huán)節(jié)之一。
【圖文】：

貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院 2015 屆科學(xué)學(xué)位碩士研究生學(xué)位論文18漿淡染；少數(shù)肝細(xì)胞脂肪變性；肝匯管區(qū)可見(jiàn)結(jié)締組織輕度增生。（圖1）1A 1B1C 1D圖1 大鼠肝臟組織病理形態(tài)學(xué)變化對(duì)照組(1A)，氟中毒組(1B)，，阻斷劑組(1C)，阻斷對(duì)照組(1D) HE 中倍放大Figure 1. Pathological changes in liver tissue in the experimental ratsControl group(1A), fluorosis group(1B), blocking group(1C), blocking control group(1D).There appeared edema in the liver cell of rats with fluorosis(1B); small vacuolardegeneration in some cytoplasm of the liver cell and mild hyperplasia of connective tissue inhepatic periportal(1B and 1D)2.5 大鼠肝組織PI3K、AKT蛋白表達(dá)水平2.5.1 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠肝組織PI3K、AKT1的蛋白表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域主要出現(xiàn)在肝小葉的小葉中心區(qū)及匯管區(qū)，細(xì)胞核或者細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒。對(duì)照組PI3K、AKT1蛋白表達(dá)較少；氟中毒組和阻斷對(duì)照組陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)明顯增多，顏色較深；與氟中毒組和阻斷劑對(duì)照組比較，阻斷劑組肝細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)

2G 2HPI3K Akt圖2 大鼠肝組織中PI3K、Akt1蛋白的表達(dá)情況（注：對(duì)照組:2A 和 2B；氟中毒組：2C 和 2D；阻斷組：2E 和 2F；阻斷對(duì)照組：2G 和 2H）中倍放大Fig.2 The protein of PI3K and Akt in the liver of different groups. Control group(2A and 2B),fluorosis group(2C and 2D), blocking group(2E and 2F), blocking control group(2G and 2H).
【學(xué)位授予單位】：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R595

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 梅梅;于燕妮;陳楊;呂學(xué)霞;官志忠;;不同濃度氟對(duì)大鼠肝、腎功能及氧化應(yīng)激的影響[J];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年04期

2 褚啟龍,王愛(ài)國(guó),夏濤,張明,劉方,劉宏凱,楊克敵;氟致人胎肝細(xì)胞氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究[J];中國(guó)地方病學(xué)雜志;2004年02期

3 吳益;趙倩;章子貴;楊三平;;慢性氟中毒致大鼠腎臟損傷作用[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2010年09期

4 郭曉英,陳愛(ài)莉,孫貴范;氟對(duì)大鼠肝臟氧化應(yīng)激及超微結(jié)構(gòu)的影響[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年04期

5 趙麗軍;孫玉富;于光前;孫殿軍;;評(píng)價(jià)地方性氟中毒防控效果的唯一標(biāo)準(zhǔn)——地方性氟中毒病區(qū)控制標(biāo)準(zhǔn)(GB17017-2010)解讀[J];中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理;2011年02期

本文編號(hào)：2652808