【摘要】：目的觀察細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(Erk)1/2、磷酸化(phospho)-Erk1/2、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和MMP-9在實(shí)驗(yàn)性慢性氟中毒大鼠腦組織中的改變及硫酸軟骨素的治療作用及機(jī)制。方法將30只清潔級(jí)SD大鼠,按體質(zhì)量(100~120g)采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組(飲用自來水,氟含量0.5 mg/L)、染氟組(氟離子:10.0 mg/L)和硫酸軟骨素處理組(氟離子:10.0 mg/L,染氟90 d后0.66 mg/kg硫酸軟骨素連續(xù)腹腔注射5 d),每組10只,實(shí)驗(yàn)周期為95 d。采用Morris水迷宮方法檢測(cè)大鼠行為學(xué)變化,蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)腦組織中Erk1/2、phospho-Erk1/2、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平,HE染色觀察大鼠大腦神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)改變,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠腦組織頂葉皮質(zhì)、海馬CA2、CA3區(qū)phospho-Erk1/2、MMP-2、MMP-9的蛋白表達(dá)及分布情況。將人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞分為對(duì)照組(正常培養(yǎng)液)、染氟組(氟離子:4.0 mmol/L)和硫酸軟骨素處理組(氟離子:4.0 mmol/L、硫酸軟骨素:0.4mg/ml)。染氟72 h,四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)經(jīng)不同濃度硫酸軟骨素處理后細(xì)胞存活率,錐蟲藍(lán)(Trypan Blue)染色觀察三組細(xì)胞存活數(shù)量并計(jì)算細(xì)胞存活率;染氟24h,電子顯微鏡觀察SH-SY5Y細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組與硫酸軟骨素處理組搜索策略以趨向式為主,趨向式搜索次數(shù)(2.20±1.09、3.40±1.34)高于染氟組(0.40±0.54),P均0.05]。染氟組phospho-Erk1/2的蛋白表達(dá)(3.26±0.88)較對(duì)照組和硫酸軟骨素處理組升高[(1.53±0.28)、(2.36±0.87),P均0.05]。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,染氟組大鼠腦海馬CA2區(qū)phospho-Erk1/2的平均灰度值(2.10±0.27)較對(duì)照組(1.50±0.08)升高,硫酸軟骨素處理組(1.30±0.18)較染氟組(2.10±0.27,P0.05)降低;海馬CA3區(qū)硫酸軟骨素處理組(0.87±0.06)較對(duì)照組(1.71±0.42,P0.05)降低。染氟組和硫酸軟骨素處理組大鼠腦頂葉皮質(zhì)區(qū)MMP-2平均灰度值[(0.47±0.13)、(0.99±0.25)]較對(duì)照組(2.00±0.34,P均0.05)降低,硫酸軟骨素處理組(0.99±0.25)較染氟組(0.47±0.13,P0.05)升高。染氟組大鼠腦頂葉皮質(zhì)、CA2和CA3區(qū)MMP-9平均灰度值[(1.34±0.70)、(1.12±0.23)、(1.52±0.29)]均較對(duì)照組[(2.81±1.33)、(2.59±0.29)、(2.34±0.35),P均0.05]降低;硫酸軟骨素處理組大鼠腦海馬CA2、CA3區(qū)[(1.87±0.16)、(2.22±0.16)]均較染氟組[(1.12±0.23)、(1.52±0.29),P均0.05]升高。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,硫酸軟骨素處理組SH-SY5Y細(xì)胞存活率[(0.92±0.23)%]和細(xì)胞計(jì)數(shù)[(7.83±1.38)×10~6]明顯高于染氟組[(0.55±0.02)%、(2.19±1.26)×10~6,P均0.05]。電鏡下觀察經(jīng)硫酸軟骨素處理組細(xì)胞內(nèi)吞飲小泡較多,仍有線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹但相對(duì)染氟組較少。結(jié)論硫酸軟骨素對(duì)慢性氟中毒所致的神經(jīng)損害具有一定的拮抗作用,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。Erk1/2通路可能通過調(diào)節(jié)MMP-2和MMP-9表達(dá)維持細(xì)胞生存內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。
【圖文】：

表 2-2. 實(shí)驗(yàn)性慢性氟中毒大鼠腦組織中 phospho-Erk1/2、Erk1/2表達(dá)水平（x—± s，，n =10）Table 2-2. Expression of phospho-Erk1/2,Erk1/2,MMP-2 and MMwith experimental fluorosis組別phospho-Erk1/2 Erk1/2 MM對(duì)照組 1.53 ± 0.28 1.61 ± 0.47 2.39 染氟組 3.26 ± 0.88a2.12 ± 1.46 1.72 CS 處理組 2.36 ± 0.87ab1.38 ± 0.60 2.58 F 值 67.92 0.64 1P 值< 0.05 > 0.05 >

表 2-3. 免疫組化測(cè)定大鼠大腦頂葉皮質(zhì) phospho-Erk1/2 蛋白表達(dá)(x—± s)Table2-3. Expression of phospho-Erk1/2 in the occipital cortex of rat brainsdetected by IHC(x—± s)分組 n 頂葉對(duì)照組 5 1.91 ± 0.34染氟組 5 1.00 ± 0.38CS處 理組5 1.28 ± 0.25F值 1.56P值 >0.05
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R599.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2636123