【摘要】：研究背景:系統(tǒng)性硬化癥相關(guān)肺間質(zhì)病變(SSc-ILD)是影響SSc預(yù)后的重要因素。Hedgehog(Hh)通路在動(dòng)物的發(fā)育過(guò)程中調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化,Suppressor of fused(Sufu)是該通路中一個(gè)關(guān)鍵的負(fù)性調(diào)控因子。當(dāng)配體缺乏時(shí),轉(zhuǎn)錄因子GLIs與Sufu結(jié)合,使GLIs不能發(fā)揮轉(zhuǎn)錄效應(yīng)。無(wú)論在體(小鼠)還是體外(細(xì)胞)實(shí)驗(yàn)中,Sufu基因沉默后觀察到Hedgehog信號(hào)通路過(guò)度激活,該通路的過(guò)度激活與肺、心臟、腎、肝和皮膚纖維化有關(guān)。吡非尼酮被證實(shí)具有抗炎和抗纖維化的作用,然而機(jī)制仍不明確�；谏鲜鲅芯楷F(xiàn)狀,我們提出假設(shè):吡非尼酮可能通過(guò)調(diào)節(jié)Sufu影響Hh通路面發(fā)揮抗纖維化的作用。目的:明確吡非尼酮是否通過(guò)上調(diào)Sufu影響Hh信號(hào)通路發(fā)揮抗纖維化作用,以促進(jìn)吡非尼酮在與Hh信號(hào)通路相關(guān)的疾病中的應(yīng)用。方法:第一部分:氣管內(nèi)滴注博來(lái)霉素后第7天行支氣管肺泡灌洗(BAL),分析炎性細(xì)胞數(shù)及IL-6水平,觀察吡非尼酮抗炎作用;第14天取肺組織觀察肺損傷情況,觀察 α-SMA、collagen I、TGF-β1、Glil、Sufu 表達(dá)情況。第二部分:慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠肺成纖維細(xì)胞,使其過(guò)表達(dá)Sufu,觀察Gli1、Gli2水平的變化,并進(jìn)一步觀察Sufu過(guò)表達(dá)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的小鼠肺成纖維細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化(α-SMA水平)膠原蛋白collagen ⅠI水平的影響。第三部分:取健康者、未經(jīng)吡非尼酮治療的SSc-ILD、接受吡非尼酮治療的SSc-ILD肺組織,觀察肺組織Gli1表達(dá)水平;取健康捐獻(xiàn)者、未經(jīng)吡非尼酮治療的SSc-ILD肺成纖維細(xì)胞行原代細(xì)胞培養(yǎng),并用吡非尼酮刺激培養(yǎng)SSc-ILD肺成纖維細(xì)胞,觀察細(xì)胞Gli1、Gli2、膜受體PTCH-1、Sufu、α-SMA、FN水平;用吡非尼酮和通路激動(dòng)劑smoothened agonist(SAG)刺激培養(yǎng)正常捐獻(xiàn)者的肺成纖維細(xì)胞,觀察Gli1、Sufu、α-SMA、FN水平和細(xì)胞增殖、遷移、凋亡情況;觀察經(jīng)吡非尼酮刺激后細(xì)胞pGSK-3β/GSK-3β、pSMAD2/SMAD2和pJNK/JNK水平。結(jié)果:第一部分:1.經(jīng)博來(lái)霉素處理后,與非吡非尼酮組相比,吡非尼酮組小鼠BALF中的IL-6、細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞少,肺損傷評(píng)分、肺組織TGF-β1、α-SMA、Collagen I表達(dá)低,Sufu表達(dá)水平高,Gli 1表達(dá)水平低。第二部分:1.與未經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞Sufu表達(dá)增高,Gli1、Gli2、表達(dá)下降,經(jīng)TGF-β1刺激后,Sufu過(guò)表達(dá)的細(xì)胞α-SMA、FN表達(dá)水平下降。第三部分1.與健康捐獻(xiàn)者比較,未接受吡非尼酮治療的SSc-ILD肺組織Gli1、Gli2、PTCH-1表達(dá)水平高;與未接受吡非尼酮治療的SSc-ILD比較,接受吡非尼酮治療的SSc-ILD肺組織Gli1表達(dá)水平明顯降低,GLI2、PTCH-1 mRNA水平雖然下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.與未經(jīng)吡非尼酮刺激的SSc-ILD的肺成纖維細(xì)胞比較,經(jīng)刺激的細(xì)胞Sufu表達(dá)明顯升高,Gli1、α-SMA、FN水平明顯下降。3.與單獨(dú)SAG刺激培養(yǎng)的細(xì)胞相比,SAG與吡非尼酮共刺激的細(xì)胞Sufu表達(dá)上調(diào),Gli1、α-SMA、FN、TGF-β1的表達(dá)下降,細(xì)胞增殖、遷移、抗凋亡能力下降。4.經(jīng)吡非尼酮刺激培養(yǎng)的SSc-ILD肺成纖維細(xì)胞pGSK-3β/GSK-3β較無(wú)刺激的細(xì)胞低,而pSMAD2/SMAD2和pJNK/JNK無(wú)明顯變化。結(jié)論:吡非尼酮通過(guò)上調(diào)Sufu抑制Hh信號(hào)通路發(fā)揮抗纖維化作用。
【圖文】：

逑胞雖然在吡非尼酮組增加較少（０．９２邋±邋０．１８邋ｖｓ．０．８７邋±邋０．２０＊邋１０５；ｊｐ＝．８５），但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)逡逑意義（圖１．１）。逡逑ＩＬ－６是另一個(gè)反應(yīng)炎癥程度的指標(biāo)，我們?cè)谥夤芊闻莨嘞匆褐杏茫牛蹋桑樱铃义戏椒z測(cè)了邋ＩＬ－６蛋白水平。在非吡非尼酮組，博來(lái)霉素可明顯增加ＩＬ－６的水平逡逑（１６＿４６±２＿５１邋ｖｓ．８．５７±２．４１邋ｐｇ／ｍｌ，；？＝＿０４，ｎ＝６ｍｉｃｅｐｅｒｇｒｏｕｐ），而經(jīng)博來(lái)霉素處理后，逡逑吡非尼酮組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的ＩＬ－６水平明顯較非吡非尼酮組低逡逑（１６．４６土２．５１邋ｖｓ．８．６７±２．１５邋ｐｇ／ｍｌ，邋ｐ＝．０３，，ｎ＝６邋ｍｉｃｅ邋ｐｅｒ邋ｇｒｏｕｐ）（圖邋１．１）。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑ｍ邐ＢＬＭ邐＊逡逑＇＊邐□邋ｎｏ邋ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ邐０邐□□0邋ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ逡逑ｉ邐Ｑ邋ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ邐□ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ逡逑°８，邋＃邋２0－逡逑ｘ邐Ｌ邐ｇ邐Ｉ邐？逡逑Ｓ邋１５邋Ｔ邐Ｔ邋Ｔ逡逑蕓邐＊邐Ｉ邐ａ逡逑￡４，邐ｔ邋ｎｆ邐ｃｄ邋ｉ0－逡逑Ｗ邋Ｉ邋ＪＬ＃邋Ｉ邐Ｎｏ邋ＢＬＭ邐ｉ邐￣￣￣￣邐＿￣￣邋￣邋—逡逑0邋＾邐Ｉ邐ｆ邋Ｌ邐—逡逑ｉ邋＊邐５逡逑／／／／邐＇／／／／邋ＢＬＭ邋°邐－邋１邋＋逡逑＾邐ｎｏ邋ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ邋ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ逡逑圖１．１吡非Ｍ

本文編號(hào)：2634606