【摘要】：目的:研究白細(xì)胞介素(IL)-35在系統(tǒng)性硬化病(SSc)患者血清和皮膚中的表達(dá),分析其與SSc相關(guān)特征的潛在關(guān)聯(lián),初步探討IL-35在SSc發(fā)病中的作用。方法:收集41例初診SSc患者和50例正常對(duì)照組的臨床資料及標(biāo)本,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)治療前后SSc患者及正常對(duì)照組血清中IL-35的水平,檢測(cè)治療前SSc患者及正常對(duì)照組血清中干擾素(IFN)-γ、IL-17A、IL-4和IL-10的水平。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)治療前SSc患者及正常對(duì)照組外周血中T helper(Th)1,Th2,Th17和Regulatory T(Treg)淋巴細(xì)胞的比例。熒光定量PCR檢測(cè)6例SSc患者和6例正常對(duì)照組皮膚組織中IL-17A、Epstein-Barr病毒誘導(dǎo)基因3(EBI3)、IL-12亞單位α(P35)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、I型膠原、叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(FOXP3)、白細(xì)胞介素12受體β2(IL-12Rβ2)和gp130的m RNA表達(dá)量。免疫組化分別6例檢測(cè)SSc患者和6例正常人皮膚組織中IL-35亞單位EBI3蛋白和P35蛋白的表達(dá)水平。蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)分別檢測(cè)6例SSc患者和6例正常人皮膚組織中IL-35的相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白(STATs)的磷酸化激活水平。分析血清IL-35水平與Th1、Th2、Th17、Treg淋巴細(xì)胞、IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10、皮膚硬化評(píng)分(MRSS)、胸部高分辨率CT(HRCT)評(píng)分的相關(guān)性;分析皮膚組織中IL-35與轉(zhuǎn)化生長因子β1、I型膠原以及MRSS評(píng)分的相關(guān)性。結(jié)果:1、ELISA結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,SSc患者血清IL-35水平明顯增高(48.86±30.87 vs.83.48±55.76,pg/ml)(P=0.006),常規(guī)治療3個(gè)月后顯著降低(83.48±55.76 vs.54.68±32.22,pg/ml)(P0.001)。在治療前,lc SSc和dc SSc患者的血清IL-35水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(93.26±56.83 vs76.55±55.14,pg/ml)(P=0.696)。2、ELISA結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,SSc患者血清IL-17A水平明顯增高(17.72±5.28 vs.23.99±14.37,pg/ml)(P=0.002),血清IFN-γ水平明顯降低(20.46±7.56 vs.12.28±5.14,pg/ml)(P=0.032),血清IL-4水平明顯增高(18.95±8.75 vs.48.24±21.74,pg/ml)(P0.001),血清IL-10水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(1.86±1.10 vs.2.77±1.53,pg/ml)(P=0.152)。系統(tǒng)性硬化病患者血清IL-35水平與血清IL-4水平呈正相關(guān)(r=0.320,P=0.041),與SSc患者檢測(cè)的其它細(xì)胞因子無關(guān)。3、SSc患者治療前血清IL-35水平與胸部HRCT評(píng)分呈正相關(guān)(rho=0.316,P=0.044),與皮膚MRSS評(píng)分和病程無關(guān);血清IL-4水平與胸部HRCT評(píng)分呈正相關(guān)(rho=0.424,P=0.006)。4、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,SSc患者CD4+INF-γ+Th1細(xì)胞比例明顯降低(12.23±4.64 vs.7.24±2.11,P=0.007),CD4+IL-4+Th2細(xì)胞比例明顯增高(2.47±0.89 vs.5.38±1.82,P=0.001),CD4+IL-17A+Th17細(xì)胞比例明顯增高(0.93±0.28 vs.1.69±0.56,P=0.013),CD4+CD25+Foxp3+Tregs細(xì)胞比例沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異(4.01±1.07 vs.3.56±0.97,P=0.294),SSc患者Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞的比值明顯低于正常對(duì)照組,Th17細(xì)胞與Tregs細(xì)胞比值有高于正常對(duì)照組的趨勢(shì)。且SSc患者血清IL-35水平與Treg細(xì)胞比例呈正相關(guān)(r=0.434,P=0.005),與Th1細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(r=-0.330,P=0.035)。5、熒光定量PCR結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,SSc患者皮膚組織中IL-17A的m RNA表達(dá)量增多(1.02±0.24 vs.5.12±1.25,P=0.001),EBI3的m RNA表達(dá)量增多(1.04±0.33 vs.5.29±2.32,P=0.008),P35的m RNA表達(dá)量增多(1.01±0.17 vs.4.32±2.53,P=0.025),FOXP3的m RNA表達(dá)量增多(1.04±0.32 vs.3.42±1.70,P=0.026),TGF-β1的m RNA表達(dá)量增多(1.13±0.29 vs.3.55±1.20,P=0.002),I型膠原的m RNA表達(dá)量增多(1.11±0.30 vs.4.21±1.78,P=0.007),而IL-12Rβ2和gp130的m RNA表達(dá)量在SSc患者和正常對(duì)照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中IL-35的亞單位EBI3m RNA表達(dá)量與P35 m RNA表達(dá)量正相關(guān);EBI3 m RNA和P35 m RNA表達(dá)量均與I型膠原m RNA表達(dá)量正相關(guān),與患者皮膚MRSS評(píng)分無關(guān)。TGF-β1 m RNA表達(dá)量與P35 m RNA表達(dá)量、I型膠原m RNA表達(dá)量及患者皮膚MRSS評(píng)分正相關(guān),與EBI3 m RNA表達(dá)量無關(guān)。6、免疫組化結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,SSc患者皮膚組織中EBI3蛋白的平均光密度值(IOD值/面積)明顯增高(0.378±0.038 vs.0.615±0.136,P0.001),P35蛋白的平均光密度值(IOD值/面積)亦明顯增高(0.343±0.034vs.0.551±0.143,P=0.002)。7、Western Blot結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,SSc患者皮膚組織中STAT1通路蛋白的磷酸化水平明顯增高(P-STAT1/GAPDH:0.2221±0.0146vs.0.4609±0.0665,P0.05);STAT4通路蛋白的磷酸化水平也明顯增高(P-STAT4/GAPDH:0.1986±0.0276 vs.0.4749±0.0609,P0.05)。結(jié)論:1、SSc患者的血清IL-35水平顯著升高,升高的血清IL-35水平與IL-4水平呈正相關(guān),與Treg細(xì)胞比例呈正相關(guān),與Th1細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān),且血清IL-35和IL-4水平均與SSc患者肺部纖維化嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。IL-35可能和Th2樣細(xì)胞因子協(xié)同作用,共同參與SSc患者肺部纖維化的發(fā)病。2、IL-35可能通過激活通路蛋白STAT1和STAT4與TGF-β1協(xié)同作用,共同參與SSc患者皮膚纖維化的發(fā)病。
【圖文】：

白細(xì)胞介素-35 在系統(tǒng)性硬化病發(fā)病中的作用研究 2019 屆碩士學(xué)位論文表 6：SSc 患者和正常對(duì)照組的細(xì)胞因子血清水平IL-17A IFN-γ IL-10 IL-4 治療前 IL-35 治療后 IL-35SSc 23.99±14.37 12.28±5.14 1.86±1.10 48.24±21.74 83.48±55.76 54.68±32.22對(duì)照組 17.72±5.28 20.46±7.56 2.77±1.53 18.95±8.75 48.86±30.87 -P 值 0.002*0.032*0.152 ＜0.001*0.006*-

與皮膚 MRSS 值無關(guān)（rho=-0.113，P=0.483），與病程無關(guān)（rho=0.076，P=0.637）。SSc 患者血清 IFN-γ水平與皮膚 MRSS 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（rho=-0.398，P=0.010），，血清 IL-4 水平與胸部 HRCT 呈正相關(guān)（rho=0.424, P=0.006），見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R593.2

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本文編號(hào)：2633327