【摘要】：目的:通過對兔雙側(cè)卵巢切除聯(lián)合甲潑尼龍琥珀酸鈉建立兔骨質(zhì)疏松模型,經(jīng)枕骨大孔向小腦延髓池注射重組兔瘦素蛋白提高腦脊液瘦素水平,觀察兔雙側(cè)股骨骨密度變化,同時(shí)檢測血清中生長激素、胰島素樣生長因子-1和骨鈣素水平變化,及血鈣、堿性磷酸酶和血磷濃度變化,以及瘦素受體、骨鈣素、骨形成蛋白-2在下丘腦以及骨鈣素、骨形成蛋白-2、I型膠原交聯(lián)在股骨中的表達(dá),探索腦脊液瘦素水平的升高對兔雙側(cè)卵巢切除聯(lián)合甲潑尼龍琥珀酸鈉誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松的影響。方法:第一部分:5月齡大小新西蘭白成年雌兔36只,隨機(jī)分為建模組(n=30)和假手術(shù)組(n=6),建模組動物全麻后行雙側(cè)卵巢切除術(shù),并于術(shù)后起每日肌注甲潑尼龍琥珀酸鈉(1mg/kg),連續(xù)8w,制備兔骨質(zhì)疏松模型;假手術(shù)組僅開腹游離出雙側(cè)卵巢即關(guān)閉腹腔,術(shù)后起每日肌注等量生理鹽水,連續(xù)8w。制備模型前(0w)和第8w,所有動物行雙能X線儀掃描測定兔雙側(cè)股骨骨密度(BMD);第0、2、4、8w,動物空腹下經(jīng)兔耳緣靜脈取血2ml,測定血鈣(Ca)、雌二醇(E2)水平變化。第二部分:骨質(zhì)疏松模型制備成功后,建模組30只動物隨機(jī)分成對照組(A)、生理鹽水組(B)、低劑量瘦素組(C)、中劑量瘦素組(D)和高劑量瘦素組(E),每組6只。建模成功后第0、3、7d,對照組動物在全麻下僅經(jīng)枕骨大孔小腦延髓池穿刺,生理鹽水組小腦延髓池內(nèi)注射生理鹽水0.05ml,低劑量組小腦延髓池內(nèi)注射0.01μg/μl重組瘦素蛋白溶液0.05ml,中劑量組注射0.1μg/μl瘦素0.05ml、高劑量組則注射1.0μg/μl瘦素0.05ml。動物于中樞瘦素給藥前(0d)和給藥后第28d、56d行雙能X線儀掃描測定雙側(cè)股骨骨密度(BMD);第0、3、7、14、28、42、56d清晨空腹取靜脈血2ml,酶聯(lián)免疫吸附法檢測腦脊液瘦素(LEP)濃度和血清生長激素(GH)、胰島素生長因子-1(IGF-1)、血骨鈣素(OC)濃度,生化儀檢測血鈣(Ca)、堿性磷酸酶(ALP)和血磷(P)濃度。第56d犧牲所有動物,PCR測定腦組織內(nèi)瘦素受體(OB-R)和骨組織骨形成蛋白-2(BMP-2)、Ⅰ-型膠原(Col-Ⅰ)的表達(dá)情況;免疫組織化學(xué)染色分別觀察腦組織和骨組織內(nèi)骨鈣素(OC)和骨形成蛋白-2(BMP-2)的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)建立兔骨質(zhì)疏松模型:術(shù)后第8w建模組BMD明顯下降;第2w、4w、8w建模組血E2持續(xù)下降,血Ca持續(xù)升高,假手術(shù)組BMD、血E2和血Ca均無明顯變化。(2)升高腦脊液瘦素濃度對骨質(zhì)疏松的影響:中樞給藥后第3、7d低、中、高劑量組腦脊液LEP水平顯著升高,且呈劑量依賴性,后逐漸回落。中樞給藥后第28、56d低、中、高劑量組BMD逐漸升高,且與給藥劑量呈劑量依賴性;第7、14、28d低、中、高劑量組血清GH水平持續(xù)升高,且呈劑量依賴性;后逐漸回落;第14、28d低、中、高劑量組血IGF-1持續(xù)升高,且呈劑量依賴性;后逐漸回落;第28、42、56d高、中劑量組組血清OC水平持續(xù)升高;第14、28、42、56d低、中、高劑量組血Ca輕度降低;第7、14d低、中、高劑量組血P輕度降低;第14、28、42、56d低、中、高劑量組血ALP水平降低,且呈劑量依賴性。第56d腦OB-R m RNA表達(dá)量各組間無差異;低、中、高劑量組骨BMP-2和Col-Ⅰm RNA表達(dá)明顯升高,且呈劑量依賴性;免疫組化染色顯示各組腦組織BMP-2和OC均無明顯陽性表達(dá);低、中、高劑量組骨組織BMP-2和OC表達(dá)明顯升高,且呈劑量依賴性。結(jié)論:(1)對5月齡雌兔行雙側(cè)卵巢切除聯(lián)合肌注甲潑尼龍琥珀酸鈉8w,其血雌二醇水平明顯下降,血鈣水平升高,股骨骨密度降低,成年性成熟雌兔行雙側(cè)卵巢切除聯(lián)合肌注甲潑尼龍琥珀酸鈉8w,可有效的制備兔骨質(zhì)疏松模型。(2)對兔骨質(zhì)疏松模型經(jīng)枕骨大孔向小腦延髓池內(nèi)注射瘦素提高中樞瘦素濃度后,血清GH、IGF-1、OC水平升高,血Ca、P、ALP水平降低,雙側(cè)股骨骨密度顯著升高,OB-R、BMP-2、OC在腦組織中未見明顯表達(dá),BMP-2、OC在骨組織中表達(dá)顯著升高。提示中樞瘦素可通過下丘腦-垂體軸作用于骨組織,促進(jìn)成骨代謝,減少骨質(zhì)流失和逆轉(zhuǎn)雙側(cè)卵巢切除聯(lián)合甲強(qiáng)龍導(dǎo)致的兔骨質(zhì)疏松發(fā)生,且呈劑量依賴性。
【圖文】：

6圖 1 雙側(cè)卵巢切除a：切開皮膚以及皮下，，切口長約 3cm；2b：從膀胱附近找到呈串珠樣的兔雙子；1c：向上游離找到卵巢；1d：切除兔卵巢。.1.4 雙側(cè)股骨骨密度的測定所有動物均于制備兔骨質(zhì)疏松模型前（0w）和制備模型第 8w，動物在禁食2h后，經(jīng)鹽酸賽拉嗪和氨基甲酸乙酯麻醉，取仰臥位固定，用雙能X線儀（DEXA

software 繪圖。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α值取雙側(cè) 0.05。1.2 結(jié)果1.2.1 兔血清中雌二醇、血鈣變化情況經(jīng)化學(xué)發(fā)光儀檢測不同時(shí)間點(diǎn)兩組血清中雌二醇(E2)濃度結(jié)果見表 1 和圖2，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析建模組和假手術(shù)組去勢后各時(shí)間點(diǎn)血清中雌二醇水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表 1 假手術(shù)組和建模組不同時(shí)間點(diǎn)兔血 E2 濃度變化( x±s, pg/ml, n1=6,n2=30)0w 2w 4w 8w假手術(shù)組 21.000±1.414 20.500±1.871 19.667±1.506 21.167±1.722建模組 21.900±2.171 12.267±1.507* 8.100±1.348* 3.133±1.408*統(tǒng)計(jì)值t =0.969，P=0.339t =-11.757，P=0.000t =-18.846，P=0.000t =-27.652，P=0.000注：t 為建模組與假手術(shù)組比較運(yùn)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析所得t值* 為建模組與假手術(shù)組比較差異有顯著性經(jīng)全自動生化儀檢測不同時(shí)間點(diǎn)兩組血鈣(Ca)濃度結(jié)果見表 2 和圖 2，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后建模組和假手術(shù)組去勢前與去勢后第 2w 血鈣水平未見顯著性差異，去
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R580

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2620489