【摘要】：目的:過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)是核受體超家族中PPARs家族中的一種配體依賴性核受體,具有抗氧化應(yīng)激的作用。為了進(jìn)一步闡明慢性氟中毒神經(jīng)系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷機(jī)制,本研究選擇慢性氟中毒大鼠及經(jīng)氟處理的體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞,測(cè)定大鼠腦組織及培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞中的PPARγ、過(guò)氧化物酶體增殖激活受體γ輔激活因子(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1a,PGC-1α)、核因子相關(guān)因子2(Nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)的表達(dá),測(cè)定氧化應(yīng)激水平,探討PPARγ在慢性氟中毒神經(jīng)系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷發(fā)生機(jī)制中的作用。方法:(1)復(fù)制慢性氟中毒動(dòng)物模型:純系健康Sprague Dawley(SD)大鼠60只,體質(zhì)量為100-120 g,隨機(jī)分為3組,即正常對(duì)照組(飲水氟含量0.5 mg/L)、低劑量染氟組(飲水氟含量為5.0 mg/L)、高劑量染氟組(飲水氟含量為50.0 mg/L),每組10只,雌雄各半,染氟時(shí)間分別為3個(gè)月及6個(gè)月。(2)采用體外培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞,經(jīng)氟化物(NaF)及15d-PGJ2處理,分為正常對(duì)照組、染氟組(4 mmol/L NaF)、單純PPARγ激動(dòng)劑組(20μmol/L 15d-PGJ2)、干預(yù)組(先加入20μmol/L15d-PGJ2 2小時(shí)后再加4 mmol/L NaF),培養(yǎng)時(shí)間為48 h。(3)測(cè)定方法:用三度法檢查氟斑牙的形成,氟離子選擇電極法測(cè)定大鼠的尿氟、血氟及腦氟含量;用Morris水迷宮方法測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力;用CCK-8法檢測(cè)15d-PGJ2SH-SY5Y細(xì)胞活性;用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)方法、蛋白印記(Western blotting)方法分別檢測(cè)大鼠腦組織中PPARγ、PGC-1α、NrF2及γ-GCS mRNA和蛋白的表達(dá)水平;用生物化學(xué)方法檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,ELISA方法檢測(cè)血清8-OHDG水平;分析PPARγ蛋白表達(dá)與SOD活性及MDA含量之間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果:(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):經(jīng)檢查,染氟組大鼠有不同程度氟斑牙形成,6月高氟組大鼠尤其明顯;經(jīng)3個(gè)月及6個(gè)月處理的低劑量染氟組和高劑量染氟組大鼠的尿氟、血氟及腦氟含量較對(duì)照組高,其與染氟含量呈正比關(guān)系;大鼠逃避潛伏期較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)、空間探索總次數(shù)顯著減少、逗留平臺(tái)象限時(shí)間明顯縮短,表明學(xué)習(xí)記憶能力明顯降低,染氟6個(gè)月的大鼠較3個(gè)月明顯;經(jīng)3個(gè)月染氟處理的大鼠大腦海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)域的PPARγ、PGC-1α、NrF2和γ-GCS mRNA及蛋白表達(dá)水平隨著染氟濃度的增加呈下降趨勢(shì),但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;經(jīng)6個(gè)月染氟處理的大鼠腦組織中上述檢測(cè)指標(biāo)水平則明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。染氟大鼠血清SOD和GSH-Px活性較正常對(duì)照組大鼠明顯減低、血清MDA含量顯著升高。相關(guān)分析結(jié)果顯示,大鼠腦組織海馬及皮質(zhì)PPARγ蛋白與腦氟含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系、與大鼠血清SOD表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系、與MDA呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。體外培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤(SH-SY5Y)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性,30μmol/L及以上濃度的15d-PGJ2作用于SH-SY5Y細(xì)胞2 h時(shí)細(xì)胞存活率明顯低于對(duì)照組(P0.05),因此選擇20μmol/L的濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的15d-PGJ2濃度;染氟組神經(jīng)細(xì)胞PPARγmRNA及蛋白水平明顯下降,SOD和GSH-Px活性明顯降低,MDA含量明顯增加。15d-PGJ2+NaF組、Na F+15d-PGJ2組神經(jīng)細(xì)胞中SOD和GSH-Px活性仍較正常對(duì)照組低、MDA含量較正常對(duì)照組高,但較單純?nèi)痉幚斫MSOD和GSH-Px活性明顯升高、MDA含量明顯下降。SH-SY5Y細(xì)胞中PPARγ蛋白表達(dá)水平與SOD活性呈正相關(guān)關(guān)系,與MDA含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:大鼠長(zhǎng)期攝入過(guò)量氟的大鼠腦組織和氟暴露處理的體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞中PGC-1α/PPARγmRNA及蛋白表達(dá)水平的降低,氧化應(yīng)激水平升高,造成腦組織以及體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。經(jīng)PPARγ激動(dòng)劑處理后,可降低氧化應(yīng)激水平,從而減輕了氟的毒性作用。激活PGC-1α/PPARγ通路,可降低由于氟中毒導(dǎo)致的氧化應(yīng)激水平升高。PGC-1α/PPARγ通路的減弱是慢性氟中毒神經(jīng)系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制之一。
【圖文】：

注：與對(duì)照組比較，*P< 0.05。圖 4. 不同濃度 15d-PGJ2 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞活性的影響Fig 4. The effect of 15d-PGJ2 on cell viability of SH-SY5YY 細(xì)胞中 PPARγ mRNA 的表達(dá)：相比，，單純 15d-PGJ2 處理組神經(jīng)細(xì)胞中 PPARγ mR染氟組神經(jīng)細(xì)胞 PPARγ mRNA 水平明顯降低；與染組神經(jīng)細(xì)胞中 PPARγ mRNA 表達(dá)水平則明顯升高（

*P< 0.05；與染氟組比較，#P< 0.05；R 表示 PPARγ 激圖 5. SH-SY5Y 細(xì)胞中 PPARγ mRNA 的表達(dá)水平Fig 5. The mRNA Expressions of PPARγ in SH-SY5Y cells5Y 細(xì)胞中 PPARγ 蛋白的表達(dá)相比，單純 15d-PGJ2 處理組神經(jīng)細(xì)胞中 PPARγ 蛋白氟組神經(jīng)細(xì)胞 PPARγ 蛋白水平明顯降低；與染氟組相胞中 PPARγ 蛋白表達(dá)水平則明顯升高（P< 0.05），
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R599.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2618917