【摘要】：目的:蛋白酪氨酸磷酸酶1B(Protein Tyrosine Phosphatase 1B,PTP1B)已被證明可以使胰島素受體去磷酸化,這與糖尿病的發(fā)病密切相關(guān)。神經(jīng)病理性疼痛是由糖尿病性神經(jīng)病變引起的嚴(yán)重并發(fā)癥。本實驗研究了脊髓PTP1B在糖尿病誘發(fā)的神經(jīng)病理性疼痛中的作用。方法:采用免疫組織化學(xué)方法檢測成年雄性Sprague-Dawley大鼠脊髓背角PTP1B的分布規(guī)律。腹腔注射鏈脲霉素,建立大鼠糖尿病模型,Western blot檢測脊髓背角PTP1B的表達(dá)及功能變化。通過縮足閾值和縮足潛伏期的測量,檢測大鼠的痛行為,觀察PTP1B抑制劑對糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛的影響。結(jié)果:(1)PTP1B特異性表達(dá)于脊髓背角神經(jīng)元,而星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)PTP1B。(2)糖尿病誘發(fā)了大鼠機械性痛覺超敏反應(yīng)。(3)糖尿病誘發(fā)了大鼠痛覺過敏反應(yīng)。(4)糖尿病誘發(fā)的神經(jīng)損傷可以使PTP1B在脊髓背角的表達(dá)量增加。(5)糖尿病誘發(fā)的神經(jīng)損傷可增強PTP1B在興奮性突觸中的定位。(6)小干擾RNA(si RNA)有效抑制大鼠脊髓背角中PTP1B的表達(dá)。(7)si RNA通過降低PTP1B的表達(dá),可以阻斷糖尿病引起的大鼠痛覺超敏。(8)si RNA通過降低PTP1B的表達(dá),可以有效阻斷糖尿病引起的大鼠痛覺過敏。(9)PTP1B在糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛中的作用,與降低Src第529位酪氨酸殘基(Tyr529)的磷酸化,誘導(dǎo)Src的活化密切相關(guān)。(10)PTP1B激活的Src,促進(jìn)了N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA,N-Methyl-D-Aspartate)型谷氨酸受體受體Glu N2B亞基第1472位酪氨酸殘基(Tyr1472)的磷酸化。(11)PTP1B的化學(xué)抑制劑,能夠劑量依賴性提高糖尿病大鼠的縮足閾值。(12)PTP1B的化學(xué)抑制劑,能夠劑量依賴性提高糖尿病大鼠的縮足潛伏期。(13)脊髓背角轉(zhuǎn)染PTP1B(C215S)(第215位半胱氨酸突變?yōu)榻z氨酸)能夠有效緩解糖尿病誘發(fā)的神經(jīng)病理性疼痛。結(jié)論:抑制脊髓背角PTP1B可以改善糖尿病誘發(fā)的神經(jīng)病理性疼痛癥狀。
【圖文】：

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 脊髓PTP1B在糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛中的作用第三章 實驗結(jié)果3.1 PTP1B 在脊髓背角中的分布已有的資料顯示：PTP1B 表達(dá)于非神經(jīng)組織以及神經(jīng)組織中，如下丘腦和海馬體等[65, 66]。研究脊髓 PTP1B 和糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛的關(guān)系，首先要明確 PTP1B 在脊髓中的分布情況。我們的免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示（圖 3-1）：PTP1B能夠與神經(jīng)元的標(biāo)志蛋白 NeuN 共染（圖 3-1A），但卻不能與小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白 OX-42 共染（圖 3-1B），也不與星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白 GFAP 共染（圖3-1C），提示：PTP1B 特異性分布于脊髓神經(jīng)元中。

大鼠的縮足閾值均顯著降低（圖3-2），表明糖尿病誘發(fā)了大鼠機械性痛覺超敏反應(yīng)。圖 3-2 腹腔注射鏈脲霉素（STZ）對大鼠縮足閾值的影響。成年 SD 雄性大鼠，Von Frey纖維測定大鼠的機械性痛覺超敏行為。Baseline 表示正常大鼠縮足閾值的基礎(chǔ)值，，箭頭表示STZ 注射的時間點。將縮足閾值與注射 STZ 的時間作圖。*表示該數(shù)據(jù)相對于基礎(chǔ)值具有顯著性，p <0.05。n = 6 只大鼠/組。3.2.2 糖尿病對大鼠縮足潛伏期的影響為進(jìn)一步探討糖尿病性神經(jīng)病理性疼痛與 PTP1B 的關(guān)系，我們又研究了糖尿病對大鼠縮足潛伏期的影響。行為學(xué)基礎(chǔ)值正常的成年 SD 雄性大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)三天后，腹腔內(nèi)注射鏈脲霉素（60 mg/kg），建立糖尿病模型，確定其第三天和第四天血糖值穩(wěn)定于 16mmol/L 以上
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.2

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本文編號：2613600