【摘要】：畢赤酵母表達的外源蛋白可進入蛋白質(zhì)的修飾加工、轉(zhuǎn)運、降解等途徑并具有天然活性,已成為比較理想的外源蛋白表達宿主之一。淀粉樣蛋白是一類淀粉樣蛋白沉積疾病的致病蛋白。因致病原因通常為蛋白質(zhì)在形成天然構(gòu)象過程中錯誤折疊而聚集,又稱蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病。常見的淀粉樣蛋白沉積疾病有阿爾茨海默病、帕金森病等神經(jīng)退行性疾病,和腦淀粉樣血管病、Ⅱ型糖尿病等。人胱抑素C在折疊過程中易形成二聚體在體內(nèi)沉積可引起退行性的腦淀粉樣血管病。而雞胱抑素C與人胱抑素C結(jié)構(gòu)相似且具有共同的的生理特性,相較于人胱抑素C卻具有高的熱力學(xué)穩(wěn)定性,作為經(jīng)典淀粉樣蛋白模型經(jīng)常被用于研究蛋白聚集和成纖維的致病機制。前期研究中我們應(yīng)用畢赤酵母表達外源淀粉樣蛋白雞胱抑素C時并沒有得到理想的表達量,原因可能是當(dāng)外源蛋白合成時需要占用宿主內(nèi)大量分子伴侶去修飾,部分外源蛋白無法正確折疊而被降解或在細胞內(nèi)沉積,導(dǎo)致表達量降低。在這個過程中,分子伴侶發(fā)揮著重要的作用。其中分子伴侶蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶被發(fā)現(xiàn)與神經(jīng)退行性淀粉樣疾病密切相關(guān)。本研究通過構(gòu)建過表達蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶重組畢赤酵母菌株,使得胞內(nèi)和胞外的外源雞胱抑素C的表達量都顯著增加。然后利用RNA-seq技術(shù)分析過表達蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶菌株與正常菌株表達雞胱抑素C的差異,最終篩選了373個差異表達基因,其中有122個差異基因注釋到KEGG生物通路,包括12個基因注釋到蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運和分解代謝途徑,21個基因注釋到蛋白質(zhì)折疊分選和降解途徑,以及24個基因參與蛋白質(zhì)的翻譯途徑等。并且應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)初步驗證了以上基因的轉(zhuǎn)錄變化情況。本研究將進一步挖掘畢赤酵母作為宿主菌生產(chǎn)外源重組蛋白藥物和生物疫苗制品的潛力,也將為尋找影響淀粉樣蛋白合成,折疊和分泌的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物和阻止淀粉樣蛋白胞內(nèi)聚集的潛在因子提供線索。
【圖文】：

1 酵母中蛋白質(zhì)的折疊、品質(zhì)管理、降解和分泌示與蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶oplasmic reticulum，ER）是蛋白質(zhì)分泌途徑合成，翻譯后加工，新合成蛋白質(zhì)的折疊性蛋白質(zhì)遞送至其合適的靶點。分泌途徑轉(zhuǎn)運。 如果進入到 ER 的蛋白質(zhì)過量，，則質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ER stress）。為了轉(zhuǎn)向其正常的應(yīng)答（Unfolded Protein Response ，UPR）正常狀態(tài)或在慢性長期的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的條胞發(fā)生凋亡[15]。因此，ER 是細胞蛋白質(zhì)內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過維持蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)而在細胞存激被認為是與淀粉樣沉積疾病和神經(jīng)退行

圖0-2酵母蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶晶體結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R597.2

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4 孫一_

本文編號：2610620