【摘要】：目的評價水飛薊素(Sil)對棕櫚酸(PA)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞IR的作用并進(jìn)一步揭示其機(jī)制。方法實驗分為正常對照(NC)組,棕櫚酸(PA)組,Sil干預(yù)低劑量(12.5μmol/L,L-Sil)組、中劑量(25μmol/L,M-Sil)組和高劑量(50μmol/L,H-Sil)組。PA誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞IR,分別給予12.5,25,50μmol/L Sil作用6 h,測定葡萄糖消耗量,使用活性氧簇(ROS)試劑盒測定ROS活性水平。采用Western blot方法檢測AKT以及還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的NOX2、p67phox、p47phox蛋白表達(dá)水平。結(jié)果PA組與NC組比較,葡萄糖耗氧量降低[(41.2±6.1)%vs(100±12)%,P=0.0087],磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表達(dá)量降低[(0.458±0.185)vs(1.00±0.13),P=0.0184],同時PA組ROS水平[(1567±189 vs(14±34)U/ml,P=0.0094]以及NAPDH氧化酶NOX2、p67、p47亞基的表達(dá)水平升高(P0.05)。Sil各組與PA組比較可增加葡萄糖消耗量[(52.8±8.4)%vs(62.2±6.5)%vs(82.3±9.8)%],差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.041、0.039、0.0076);H-Sil組磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表達(dá)量提高(0.793±0.249),與PA組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0395);Sil可降低ROS水平[(1085±252)vs(851±184)vvs(405±35)],與PA組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.047、0.023、0.0015),以及降低NAPDH氧化酶NOX2、p67、p47亞基的表達(dá)水平(P0.05),且作用強(qiáng)度隨Sil劑量的增加而增強(qiáng)。結(jié)論Sil可能通過降低NADPH氧化酶活性降低氧化應(yīng)激,從而改善HepG2細(xì)胞的IR。
【圖文】：

并邐ＮＣ邐ＰＡ邐Ｈ邋Ｓｌ１逡逑定量比較。邐ｈ５ｌ逡逑三、統(tǒng)計學(xué)方法邐Ｈ邐了逡逑采用ＳＰＳＳ邋１６．０軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。正態(tài)邐＿１（）邐，邋ｗ＾ｍ逡逑分布的計量資料以表示，兩組間比較采用邐｜0．５，逡逑分析，多組間比較采用單因素方差邐ｆｌＢ逡逑００邋￣＇＂＂￣￣逡逑分析。邐ＮＣ邐ＰＡ邐Ｈ－Ｓｉｌ逡逑結(jié)果邐與ＮＣ組比較ｗ邋ＮＣ邋ｇｒｏｕｐ，？邋Ｐ＜０．邋０１；與ＰＡ組比較ｗ邋ＰＡ逡逑ｇｒｏｕｐ，邋９邋Ｐ＜Ｃ．０．邋０５逡逑 、Ｓｉｌ增加葡萄糖消耗邐圖２邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測各組ＨｅｐＧ２細(xì)胞中Ａｋｔ通路相關(guān)蛋白表達(dá)逡逑Ｆｉｇ邋２邋Ａｋｔ邋ｐａｔｈｗａｙ－ｒｅｌａｔｅｄ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ逡逑ＰＡ組ＨｅｐＧ２細(xì)胞葡萄糖消耗量（４１．２士逡逑６．邋１）％邋較邋ＮＣ邋組（１００±１２）％邋減少（Ｐ邋＝邋０．邋００８７），Ｓｉｌ邐三、Ｓｉｌ邋降低邋ＲＯＳ邋含量逡逑各組增加葡萄糖的消耗并隨濃度增加葡萄糖消耗量邐＾邋ＮＣａｔｂ＾，ＰＡ｜Ｂ邋ＨｅｐＧ２邐ＲＯＳ邋？逡逑增加，葡萄糖消耗量分別為說８士８．邋４）％，（６２．邋２±較ＮＣ組＝［（人１５＝＝）逡逑６．５）人（８２．３＿９．８）／＾，與ＰＡ—且比較，差異有統(tǒng)ｉ＋隨Ｓｉｌ濃度增加而下降，，Ｓｉｌ各組ＲＯＳ水平分別為逡逑學(xué)意義（Ｐ＝0．邋０４１、０．邋０３９、０．邋００７６）。（圖邋１）邐（１０８５±２５２），（８５１±１８４），（４０５±３５）Ｕ／ｍｌ，與邋ＰＡ逡逑

ｎ邐Ｍ－ｓｎ邐Ｈ－ｓｎ邐ＮＣ邐ＰＡ邐Ｌ－Ｓｉ邋丨乻丨邐ａ－ｓｉ．逡逑２．５邐＊Ａ邐１．５邋■逡逑Ｉ＾Ｆｒｉ邋＃Ａ＾逡逑ｉｉ邋ｉｌ邋Ａ邋ｉｌＸ）？門蠢蠢角＿逡逑SD１－邋■…逡逑＿ＬＪ邋ＬＪ邋ＬＪ邋Ｊｌ邋，邋１邋＿邋Ｉ邋■」ｂｄ邋［」逡逑ＮＣ邐ＰＡ邐Ｌ－Ｓｉｌ邐Ｍ－Ｓｉｌ邋Ｈ－Ｓｉｌ邐ＮＣ邐ＰＡ邐Ｌ－Ｓｉｌ邐Ｍ－Ｓｉｌ邐Ｈ－Ｓｉｌ逡逑與邋ＮＣ邋組比較仍邋ＮＣ邋ｇｒｏｕｐ，邋？邋Ｐ＜０．邋０５，Ｐ＜０．邋０１；與邋ＰＡ邋組比較仍邋ＰＡ邋ｇｒｏｕｐ，邋ＡＰ＜０．邋０１逡逑圖４各組ＮＡＤＰＨ氧化酶ＮＯＸ２、ｐ６７ｐｈ0ｘ、ｐ４７ｐｈ0ｘ亞基蛋白表達(dá)水平逡逑Ｆｉｇ邋４邋Ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＮＡＤＰＨ邋ｏｘｉｄａｓｅ邋ｓｕｂｕｎｉｔｓ邋（ＮＯＸ２，ｐ６７ｐｈｏｘ邋ａｎｄ邋ｐ４７ｐｈｏｘ）邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ逡逑研究［２］表明，氧化應(yīng)激是肥胖誘導(dǎo)ＩＲ和Ｔ２ＤＭ邐劑量依賴關(guān)系，說明Ｓｉｌ可通過降低Ｒ0Ｓ改善逡逑的因素。高脂飲食、脂肪堆積均可顯著加重哺乳動邐ＨｅｐＧ２細(xì)胞的ＩＲ。逡逑物體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平，從而對各組織細(xì)胞中的生邐肝臟中ＲＯＳ的一個主要來源是ＮＡＤＰＨ氧化逡逑物大分子造成氧化損傷。體內(nèi)氧化應(yīng)激的主要標(biāo)志邐酶．由ＮＯＸ２、ｐ６７ｐｈ0ｘ、ｐ４７ｐｈ0ｘ等亞基構(gòu)成［６］。肝逡逑是ＲＯＳ水平的增加。既往研究［５］表明，降低ＲＯＳ邐臟中ＮＡＤＰＨ氧化酶活性升高在高脂引起的ＩＲ中逡逑水平可顯著改善肝臟ＩＲ。本實驗證實，Ｓｉｌ作用于邐起著關(guān)鍵性的作用［７］。多項研究［８１°］表明，降低逡逑ＩＲ的ＨｅｐＧ２細(xì)胞，可降低細(xì)胞內(nèi)ＲＯＳ的水平并成邐ＮＡＤＰＨ氧化酶的ＮＯＸ２亞基、ｐ６７ｐｈｏｘ亞基、

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本文編號：2582579