【摘要】：骨骼肌是機(jī)體利用脂質(zhì)一個非常重要的組織。越來越多的研究表明肌細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的升高與胰島素抵抗及2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。脂滴表面蛋白可調(diào)控肌細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的儲存。Plin2是骨骼肌中表達(dá)量最主要的脂滴蛋白之因此研究Plin2是如何調(diào)控骨骼肌中脂質(zhì)的合成和代謝,避免脂質(zhì)積累過多引起的脂毒性和胰島素抵抗是及其重要的。本文主要以小鼠成骨骼肌細(xì)胞C2C12細(xì)胞為模型來研究脂代謝的動態(tài)變化以及敲除Plin2時細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝變化和脂滴表面蛋白的動態(tài)變化。在外源脂肪酸油酸刺激下,Plin2的表達(dá)量可隨著時間點和濃度梯度逐漸升高。蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析表明Plin2是C2C12細(xì)胞脂滴蛋白的主要蛋白,銀染和免疫印跡進(jìn)一步證實了Plin2是主要蛋白條帶。緊接著,我們在C2C12細(xì)胞中敲除Plin2,發(fā)現(xiàn)敲除Plin2后,C2C12細(xì)胞合成以及水解TAG的能力均減弱,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的脂滴數(shù)目減少同時脂滴變的更大。我們再次純化野生型和Plin2敲除株細(xì)胞脂滴,并進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察和蛋白質(zhì)組學(xué)分析。粒度儀檢測結(jié)果顯示敲除珠細(xì)胞的脂滴平均直徑為843.3納米,而野生型細(xì)胞的脂滴平均直徑僅為377.1納米。此外脂滴表面蛋白亦發(fā)生了不同程度的改變：Plin3成為脂滴蛋白的主要條帶；ACSL1在脂滴上明顯增多,而ATGL、DGAT1、DGAT2、Rab18和ACSL3均減少。另外脂滴體外實驗表明,Plin2敲除珠細(xì)胞合成PC和TAG能力顯著增強(qiáng)。綜上所述,小鼠成肌細(xì)胞C2C12的脂滴主要表面蛋白Plin2通過增加脂滴數(shù)目、減小脂滴直徑以減少脂滴體表比來加速細(xì)胞整體的r},性脂的合成速率和水解速率以維持止常的脂質(zhì)代謝動態(tài)平衡。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R589

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本文編號：2582405