本文關(guān)鍵詞：自噬在高糖誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞脂毒性中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一,顯著增加了糖尿病患者的死亡率,也是導(dǎo)致全球終末期腎臟病(end-stage renal disease, ESRD)最常見的原因。糖尿病腎病的特點(diǎn)是腎小球和小管間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)的過(guò)度沉積導(dǎo)致腎臟的進(jìn)行性纖維化,最終引起組織的不可逆損傷和腎功能的下降。腎間質(zhì)纖維化是糖尿病腎病發(fā)展到終末期腎衰竭的共同途徑,而小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)被認(rèn)為是腎間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。前期研究指出高糖引起的脂毒性參與小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,提示糖脂代謝紊亂與細(xì)胞功能的維護(hù)有著一定的聯(lián)系。自噬是一種高度保守的“自我吞噬(self-eating)"機(jī)制,通過(guò)對(duì)胞內(nèi)有毒物質(zhì)及受損細(xì)胞器的降解及循環(huán)再利用維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。有研究表明,調(diào)控自噬的相關(guān)營(yíng)養(yǎng)信號(hào)通路也參與了許多代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來(lái)自噬在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制研究領(lǐng)域已引起廣泛關(guān)注,被認(rèn)為是預(yù)防或減緩糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。基于自噬與糖脂代謝之間的緊密關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)旨在探究高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)自噬活性水平的改變及其與腎臟脂毒性和EMT之間的可能關(guān)聯(lián),為防治糖尿病腎病尋找可能的新靶點(diǎn)。方法1、人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)的培養(yǎng)及分組：細(xì)胞在5%CO2,37℃培養(yǎng)箱中,以含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),細(xì)胞隔天換液,2-3天傳代一次,實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組：低糖組(LG,5.5 mmol/L葡萄糖),高糖組(HG,30 mmol/L葡萄糖),高糖+氯喹(CQ)組,高糖+3-甲基腺嘌呤(3-MA)組,高糖+Atg5小RNA干擾組(Atg5 siRNA),高糖+Atg5干擾對(duì)照組.(Atg5NC),高糖+雷帕霉素(Rapamycin,Rap)組,高糖-DMSO對(duì)照組,高糖-Atg5 siRNA組+雷帕霉素組,高糖-Atg5 NC組+雷帕霉素組。2、應(yīng)用western blot檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)高糖刺激下人腎小管上皮細(xì)胞自噬相關(guān)標(biāo)志物Beclin1、LC3、p62的變化。3、高糖下應(yīng)用自噬抑制劑CQ、3-MA和Atg5 siRNA干擾及激活劑雷帕霉素刺激細(xì)胞,光鏡下觀察不同刺激下HK-2細(xì)胞形態(tài)的變化。4、油紅O染色檢測(cè)不同刺激下人腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的情況。5、應(yīng)用western blot檢測(cè)不同刺激下高糖培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞EMT相關(guān)指標(biāo)E-cadherin和Vimentin的變化情況。結(jié)果1、Western blot檢測(cè)人腎小管上皮細(xì)胞自噬的變化：高糖刺激HK-2細(xì)胞6 h、24 h、48 h、96 h后,自噬相關(guān)指標(biāo)Beclin1、LC3表達(dá)增多(P0.05),p62表達(dá)減少(P0.05)。2、光鏡和油紅O染色觀察HK-2細(xì)胞形態(tài)變化和脂質(zhì)沉積：光鏡下正常HK-2細(xì)胞呈卵圓形,融合后呈鋪路石樣,高糖刺激96h后細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形改變,細(xì)胞連接松散,胞內(nèi)出現(xiàn)紅色的脂質(zhì)沉積；加入自噬抑制劑CQ、3-MA及Atg5 siRNA干擾,刺激細(xì)胞48 h即可出現(xiàn)長(zhǎng)梭形改變,并出現(xiàn)脂質(zhì)沉積。而高糖下加入自噬激活劑雷帕霉素刺激96h,細(xì)胞也未出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變及脂質(zhì)沉積。3、Western blot檢測(cè)HK-2細(xì)胞EMT相關(guān)指標(biāo)的變化：與單純高糖組相比,合并加入CQ、3-MA及Atg5 siRNA干擾刺激48 h后,間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin表達(dá)增加,上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)減少(P0.05)；加入Rapamycin刺激96h后Vimentin表達(dá)減少,E-cadherin表達(dá)增多(P0.05)。結(jié)論1、體外研究發(fā)現(xiàn)高糖培養(yǎng)下人腎小管上皮細(xì)胞自噬表達(dá)增強(qiáng)。2、抑制自噬可加重高糖引起的腎臟脂質(zhì)沉積和EMT改變,雷帕霉素通過(guò)增強(qiáng)自噬可部分改善脂質(zhì)沉積和EMT,因此可進(jìn)一步將自噬作為防治DN的新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 自噬 脂毒性 上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 附圖表32-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 致謝45-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文46-47
• 附件47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李霖;李紅;;糖尿病腎病與自噬[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2012年08期

  本文關(guān)鍵詞：自噬在高糖誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞脂毒性中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：256676