【摘要】：研究背景尿酸是鳥(niǎo)嘌呤和腺嘌呤代謝的主要代謝產(chǎn)物,具有抗氧化、調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能,當(dāng)病理情況下,尿酸水平持續(xù)升高,誘發(fā)炎癥反應(yīng)、白細(xì)胞激活導(dǎo)致內(nèi)皮功能受損。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),尿酸不同程度的升高是糖尿病和冠心病的危險(xiǎn)因素之一,但是尿酸能否作為獨(dú)立的危險(xiǎn)因素,參與疾病的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后仍有較大爭(zhēng)議。近年來(lái)的國(guó)內(nèi)外的研究提示,在穩(wěn)定性心絞痛患者中,尿酸不同程度的升高與疾病的預(yù)后無(wú)明顯相關(guān),在急性冠脈綜合征患者中,高尿酸血癥與疾病的再發(fā)和死亡存在明顯關(guān)系,但是與冠脈血管的嚴(yán)重程度沒(méi)有關(guān)系。本課題前期臨床研究也顯示,急性冠脈綜合征患者尿酸水平升高與其的預(yù)后相關(guān),生存分析模型顯示,尿酸水平在500-600μmmol/L時(shí),冠心病患者的預(yù)后較差。尿酸與冠心病的關(guān)系與其它傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素如高血壓、糖尿病、高血脂、吸煙相比,其對(duì)心血管疾病的影響是單獨(dú)起作用還是協(xié)同其他因素作用仍不清楚。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于尿酸的研究多停留在臨床分析和少量的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),對(duì)于高尿酸環(huán)境對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)的影響及其相關(guān)的機(jī)制并不明了,有待進(jìn)一步研究。研究目的研究不同濃度尿酸對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響及其可能的相關(guān)機(jī)制。對(duì)象和方法1.研究對(duì)象人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)。2.研究方法2.1培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,用第4-6代的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。2.2用CCK-8試劑盒及MTT試劑盒測(cè)定不同濃度尿酸對(duì)于人臍靜脈血管細(xì)胞的毒性和細(xì)胞增殖的影響。2.3不同濃度尿酸及TNF-α預(yù)處理處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞:根據(jù)我們前期收集的冠心病人的臨床資料,將高尿酸水平進(jìn)行分層冠心病人群尿酸水平輕度升高平均值480μmmol/L,冠心病人群高尿酸水平的中度升高平均值590μmmol/L,冠心病人群高尿酸水平高度升高平均值700μmmol/L,確定用80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL的尿酸處理細(xì)胞,同時(shí)用10ng/mL的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基處理。利用人腫瘤壞死因子-α(hTNF-α,10ng/ml)做為陽(yáng)性對(duì)照。H1:0ng/ml,對(duì)照組H2:hTNF-α:10ng/ml,陽(yáng)性對(duì)照組H3:尿酸80μg/mL(冠心病人群高尿酸水平的輕度升高平均值)+hTNF-α(1 0ng/ml)組H4:尿酸10Oμg/mL(冠心病人群高尿酸水平的中度升高平均值)+hTNF-α(1 Ong/ml)H5:尿酸120μg/mL(冠心病人群高尿酸水平的高度升高平均值)+hTNF-α(10ng/ml)組2.4過(guò)氧化氫試劑盒測(cè)定細(xì)胞外過(guò)氧化氫(H202)和用熒光酶標(biāo)儀測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧。2.5 用 ELISA 測(cè)定 ET-1(endothelin-1)、TF(tissue factor)等因子蛋白水平的表達(dá)。2.6用q-PCR測(cè)定ET-1、TF等因子mRNA水平的表達(dá)。2.7用Western Blotting測(cè)定炎癥因子ICAM-1、VCAM-1、IL-18的表達(dá)和信號(hào)通路蛋白t/p-IKKα,t/p-IκBα和內(nèi)參蛋白β-actin的表達(dá)。3.統(tǒng)計(jì)方法使用版本為19.0的SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)形式為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。采用單因素方差分析的方法對(duì)各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行比較。P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.01具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.研究結(jié)果4.1當(dāng)尿酸濃度在80μg/mL、10Oμg/mL、120μg/mL時(shí)HUVEC的細(xì)胞活力未出現(xiàn)明顯下降(P0.05),表明這三個(gè)濃度對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的活力基本無(wú)影響,當(dāng)尿酸濃度在200μg/mL、400μg/mL、800μg/mL時(shí)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的活力則顯著下降(P0.05)。4.2H202在H1、H2、H3、H4、H5這五個(gè)組的表達(dá)為2.46±0.25μmmol/L、3.700±0.07μmmol/L、4.75±0.02μmmol/L、5.20±0.23μmmol/L、3.722±0.26μmmol/L。與H2組相比,H3、H4組中H202的分泌明顯高于H2組(P0.05);細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的OD值在H1、H2、H3、H4、H5組分別為36.5±6.1、638.2±26.8、1196.5±74、1400.8±111、888.2±87.2。與 H2 組相比,H3、H4 組中ROS的分泌明顯高于H2組(P0.01),表明尿酸能促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)活性氧和細(xì)胞外過(guò)氧化氫的產(chǎn)生。4.3 ET-1 在 H1、H2、H3、H4、H5 組表達(dá)分別為 199.2±13.0 pg/mL、802.6±72.7pg/mL、1134.4±135.0 pg/mL、1255.6±275.4 pg/mL、463.1±147.0 pg/mL。與H2組相比,H3、H4組中ET-1的分泌明顯高于H2組(P0.05);TF在 H1、H2、H3、H4、H5 組表達(dá)分別為 74.5±7.6pg/mL、142.0± 15.0pg/mL、211±26.0 pg/mL、250±37.3 pg/mL、254.4±30.2 pg/mL 的水平升高。與 H2 組相比,H3、H4、H5組中TF的分泌明顯高于H2組(P0.01);ET-1、TF在mRNA水平的變化與其蛋白水平變化基本相符合,表明尿酸能使TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)水平升高。與H2組相比,H3、H4、H5組中VCAM-1的分泌明顯高于H2組(P0.01)。與H2組相比,H4、H5組中ICAM-1的分泌明顯高于H2組(P0.01)。與H2組相比,H3、H4組中IL-18的分泌明顯高于H2組(P0.01)。4.4尿酸對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的NF-κB信號(hào)通路t/p-IKKα,t/p-IκBα蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。5.研究結(jié)論5.1尿酸能增加TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激及其產(chǎn)物和炎癥因子的產(chǎn)生。5.2尿酸對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的IKKα-IκBα信號(hào)通路(NF-κB)未見(jiàn)明顯影響。
【圖文】：

圖３－１不同尿酸濃度對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｕｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｏｎ邋ｈｕｍａｎ邋ｕｍｂｉｌｉｃａｌ邋ｖａｓｃｕｌａｒ邋ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．逡逑Ｈｕｍａｎ邋ｕｍｂｉｌｉｃａｌ邋ｖａｓｃｕｌａｒ邋ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ逡逑ｕｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋（５０－８００邋＾ｇ／ｍｌ），ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｅｘｔｅｎｔ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｗａｓ邋ｍｅａｓｕｒｅｄ邋ｂｙ逡逑ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ－８邋ｋｉｔ邋．Ｔｈｅ邋ｖａｌｕｅｓ邋ａｒｅ邋ｔｈｅ邋ｍｅａｎｓ邋ｏｆ邋ｔｈｒｅｅ邋ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ邋ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．逡逑見(jiàn)圖邋３－１，用邋５０（ｉｇ／ｍｌ、１００｜ｉｇ／ｍｌ、２００＾ｉｇ／ｍｌ、４００｜ｉｇ／ｍｌ、８００｜ｉｇ／ｍｌ邋的尿酸逡逑干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞１２小時(shí)后，，過(guò)高濃度的尿酸對(duì)細(xì)胞活力的抑制比較明顯，逡逑其中在尿酸濃度超過(guò)２００ｐｇ／ｍｌ的時(shí)候細(xì)胞的活力下降明顯（尸＜０．Ｗ）。逡逑

ｗａｓ邋ｍｅａｓｕｒｅｄ邋ｂｙ邋ＭＴＴ邋ｋｉｔ邋．Ｔｈｅ邋ｖａｌｕｅｓ邋ａｒｅ邋ｔｈｅ邋ｍｅａｎｓ邋ｏｆ邋ｔｈｒｅｅ邋ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ逡逑ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．逡逑見(jiàn)圖３－２，邐８０｜ｉｇ／ｍｌ、１００｜ｉｇ／ｍｌ、１２０（ｉｇ／ｍｌ這三個(gè)尿酸濃度對(duì)人擠靜脈內(nèi)逡逑皮細(xì)胞（ＨＵＶＥＣ）的增殖和細(xì)胞活力基本無(wú)影響，各實(shí)驗(yàn)組間ＨＵＶＥＣ的增殖逡逑和細(xì)胞活力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞ａ0５）。逡逑３７逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R589.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李曉霞;連希艷;;高尿酸血癥與血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2015年02期

2 Li Chen;Xian-lun Li;Wei Qiao;Zhou Ying;Yan-li Qin;Yong Wang;Yu-jie Zeng;Yuan-nan Ke;;Serum uric acid in patients with acute ST-elevation myocardial infarction[J];World Journal of Emergency Medicine;2012年01期

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本文編號(hào)：2542792