【摘要】：目的：探討TXNIP對(duì)胰島β細(xì)胞衰老的影響及TXNIP可能參與的影響衰老的信號(hào)通路,尋找潛在的胰島β細(xì)胞老化的治療靶點(diǎn),為糖尿病的防治提供新思路。方法：小鼠MIN6細(xì)胞通過(guò)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法構(gòu)建TXNIP沉默(MIN6-KO)及過(guò)表達(dá)(MIN6-OE)的細(xì)胞株,空載質(zhì)粒(MIN6-GFP)為對(duì)照組。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞按常規(guī)方法進(jìn)行培養(yǎng),RT-PCR及western blot檢測(cè)不同代數(shù)沉默及過(guò)表達(dá)TXNIP后MIN6細(xì)胞中P16ink4a、EZH2, TRX基因及蛋白的改變,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期,衰老相關(guān)-β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)衰老細(xì)胞率,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,胰島素還原法檢測(cè)TRX活性。進(jìn)一步檢測(cè)沉默TXNIP基因后高糖刺激下P38MAPK和ERK1/2及其磷酸化的變化,抑制劑PD169316、PD98059抑制信號(hào)通路后,觀察P38MAPK、 ERK1/2蛋白磷酸化的變化及TXNIP、TRX、P16ink4a、EZH2的變化情況。結(jié)果：在MIN6細(xì)胞中,隨傳代次數(shù)的增加TXNIP的表達(dá)增加(P0.05)。過(guò)表達(dá)TXNIP后P16ink4a表達(dá)增加(P0.05),EZH2表達(dá)減少(P0.05),TRX表達(dá)減少,活性降低(P0.05)；細(xì)胞衰老明顯,細(xì)胞周期呈現(xiàn)G1→S期阻滯,增殖抑制。沉默TXNIP后MIN6細(xì)胞P16ink4a表達(dá)降低(P0.05),TRX表達(dá)升高,活性增加(P0.05), EZH2表達(dá)升高無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),并且沉默TXNIP后細(xì)胞增殖增加,衰老延緩。高糖刺激下,沉默TXNIP的MIN6細(xì)胞較對(duì)照組P38MAPK磷酸化水平降低,ERK1/2磷酸化水平升高。P38MAPK通路抑制后,TXNIP、P16ink4a表達(dá)均降低,TRX、EZH2表達(dá)無(wú)明顯變化(P0.05),但TRX活性升高(P0.05)。抑制ERK1/2通路后,TXNIP、P16ink4a表達(dá)均升高(P0.05),EZH2表達(dá)降低(P0.05),TRX表達(dá)無(wú)明顯變化(P0.05),活性有降低趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：TXNIP是胰島β細(xì)胞衰老的相關(guān)蛋白之一,參與了胰島β細(xì)胞衰老的調(diào)控。TXNIP表達(dá)上調(diào)可以促進(jìn)胰島β細(xì)胞衰老,抑制增殖；減少TXNIP的表達(dá)可以減緩胰島β細(xì)胞的衰老,提高增殖速率。沉默TXNIP后可以抑制高糖刺激下P38MAPK通路的活化,促進(jìn)ERK1/2的磷酸化。P38MAPK和ERK 1/2信號(hào)通路是調(diào)節(jié)胰島β細(xì)胞中TXNIP與P16ink4a表達(dá)的信號(hào)通路,也可能是TXNIP介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞衰老的信號(hào)通路。
【圖文】：

逡逑（圖４Ｂ），與ＭＩＮ６－Ｇ陽(yáng)細(xì)胞相比，過(guò)表達(dá)ＴＸＮＩＰ的ＭＩＮ６細(xì)胞的表現(xiàn)出Ｇ１期增逡逑力口，Ｓ期減少；沉默ＴＸＮＩＰ組則表現(xiàn)出Ｓ期增加，Ｇ１期減少（尸＜０．邋０５）（圖４邋Ｃ），逡逑提示在ＴＸＮＩＰ過(guò)表達(dá)后出現(xiàn)Ｇ１—Ｓ期阻滯，從而影響細(xì)胞增殖，而ＴＸＮＩＰ沉默的ＭＩＮ６逡逑細(xì)胞則不產(chǎn)生這一阻滯，Ｓ期逐漸延長(zhǎng)。隨著傳代系數(shù)的增加，過(guò)表達(dá)ＴＸＮＩＰ的細(xì)逡逑胞表現(xiàn)出持續(xù)的Ｇ１期X椉櫻悠詡跎�，沉默ＴＸＮＩＰ的细胞韵娀产生此灭嬙钢\洹ｅ義獻(xiàn)凵纖觶裕兀危桑鋅桑錐韻赴芷詡跋赴鮒巢盒雜跋歟澩錚裕兀危桑瀉簀義匣峒鈾儐赴ダ�，减慢其怎V場(chǎng)ｅ義狹膶甦蕕k榦逡逑、＂、６卿Ｒ邋＇邐ＭｌＸｅ＾ＫＯ邋‘邋．私．邋＇邋，知：，＇的ＩＮＷＫ邋Ｖ－；，，：旅逡逑枺姦阻裳榦逡逑輛晈巧《巧賄媭嫉Ｉ妑＾披ｆ店畿

下降了邋７６％邋（八化０１），而ＴＸＮＩＰ沉默組ＴＲＸ活性增高約２０％。在過(guò)表達(dá)ＴＸＮＩＰ逡逑的高代數(shù)組ＭＩＮ６細(xì)胞中，ＴＲＸ活性下降更為明顯，而在ＴＸＮＩＰ沉默的ＭＩＮ６細(xì)胞中，逡逑ＴＲＸ仍可１＾１保持高活性，較對(duì)照組X椉恿飼桑ュ澹ɑ埃擔(dān)ㄍ跡罰╁義希保

本文編號(hào)：2517224