【摘要】：研究背景糖尿病是一種以高血糖為特征的代謝性疾病,控制不良會(huì)引起許多并發(fā)癥,其中血管并發(fā)癥是糖尿病患者死亡的主要原因。內(nèi)皮細(xì)胞損傷是糖尿病血管損傷過(guò)程中最早出現(xiàn)的病理現(xiàn)象。在糖尿病狀態(tài)下,長(zhǎng)期的高血糖血癥刺激,誘導(dǎo)發(fā)生氧化應(yīng)激,造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。當(dāng)機(jī)體受到有害刺激時(shí),體內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡,從而引起組織細(xì)胞發(fā)生氧化損傷。研究發(fā)現(xiàn),在糖尿病狀態(tài)下,內(nèi)皮細(xì)胞ROS生成增多,導(dǎo)致發(fā)生氧化應(yīng)激,從而引起糖尿病心血管損傷。機(jī)體內(nèi)抗氧化應(yīng)激的酶也有很多,如過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)和超氧化物歧化酶(SOD)。它們構(gòu)成抗氧化系統(tǒng),維持氧化與抗氧化的動(dòng)態(tài)平衡。GLP-1作為一種治療糖尿病的新型藥物,不僅可以降低血糖,還可以抑制氧化應(yīng)激引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,但其抗氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制尚未闡明。另外,GLP-1可直接促進(jìn)細(xì)胞增殖,提高細(xì)胞生存,例如胰島β細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、纖維母細(xì)胞和心肌細(xì)胞。那么,GLP-1對(duì)腫瘤細(xì)胞是否也存在類似的促增殖作用?GLP-1長(zhǎng)期用藥是否存在致癌風(fēng)險(xiǎn)?目前還未有定論。再有,氧化應(yīng)激被證實(shí)可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),GLP-1的抗氧化應(yīng)激作用是否會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞的EMT轉(zhuǎn)化產(chǎn)生影響,目前尚未見(jiàn)報(bào)道。目的1、探討胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)對(duì)過(guò)氧化氫(H202)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。2、探討胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖和EMT的影響。方法1、取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs),分為正常對(duì)照組、H202組、GLP-1組、H2O2+10nmol/L GLP-1 組、H202+100nmol/L GLP-1 組、H202+1000nmol/L GLP-1組。采用熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基(ROS)水平、觀察細(xì)胞骨架F-actin變化和過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶1(GPX1)蛋白表達(dá);采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡比率;Western Blotting檢測(cè)磷酸化的雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶1(GPX1)蛋白水平;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈鎖反應(yīng)(QPCR)檢測(cè)抗氧化酶:過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶1(GPX1)基因的表達(dá)變化。2、CCK8試劑盒檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞(PANC-1)增殖;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PANC-1細(xì)胞的遷移。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈鎖反應(yīng)(QPCR)檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)基因E-鈣黏素(E-cadherin)和N-鈣黏素(N-cadherin)的表達(dá)變化。結(jié)果1、H2O2組HUVEC細(xì)胞骨架破壞明顯,細(xì)胞內(nèi)ROS含量增加,細(xì)胞凋亡率增加;加入GLP-1后,細(xì)胞骨架破壞受到顯著抑制,ROS含量減少,凋亡率降低。Western Blotting結(jié)果顯示,H2O2組p-mTOR表達(dá)降低,GLP-1可以提高p-mTOR表達(dá),使蛋白水平趨于正常;加入GLP-1受體拮抗劑艾塞納肽(9-36)后,GLP-1不能上調(diào)p-mTOR表達(dá)。H202作用后,CAT、SOD2和GPX1基因表達(dá)降低,CAT和GPX1蛋白表達(dá)量也降低,而GLP-1可以逆轉(zhuǎn)這些抗氧化酶表達(dá)的降低。2、不同濃度的GLP-1對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖率沒(méi)有影響,但是可以抑制PANC-1細(xì)胞遷移。H202作用于PANC-1細(xì)胞后,E-cadherin基因表達(dá)下調(diào),N-cadherin基因表達(dá)上調(diào),GLP-1可逆轉(zhuǎn)E-cadherin基因表達(dá)下降和N-cadherin基因表達(dá)升高。結(jié)論1、GLP-1可能通過(guò)增加p-mTOR蛋白表達(dá),活化mTOR通路起保護(hù)作用;GLP-1通過(guò)上調(diào)CAT、SOD2和GPX1表達(dá),抑制ROS產(chǎn)生,保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷。2、GLP-1對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖沒(méi)有影響,但是可以抑制PANC-1細(xì)胞遷移。3、GLP-1抑制H202誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞的EMT。
【圖文】：

Ｈ２０２邋（５０0ｎｍｏｌ／Ｌ）作用８ｈ后細(xì)胞內(nèi)ＲＯＳ含量明顯增加，而ＧＬＰ－１逡逑可有效降低ＲＯＳ含量，，且呈濃度依賴性，１０００ｎｍｏｌ／Ｌ邋ＧＬＰ－１可使細(xì)胞內(nèi)ＲＯＳ逡逑水平接近正常細(xì)胞水平（圖１．２）。逡逑２１逡逑

ＧＬＰ－丨使凋亡率從１１．８％邋±１．３下降到６．８５％±０．２５，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。逡逑ｌＯＯＯｎｍｏｌ／Ｌ邋ＧＬＰ－１使調(diào)亡率從１１．８％邋±１．３下降到５．６％±１．６，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意逡逑義（Ｐ＜０．０５），并且呈現(xiàn)出濃度依賴性（圖１．３）。以上結(jié)果說(shuō)明，Ｈ２０２作用于逡逑２２逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2516966