【摘要】：目的:研究上調(diào)生長(zhǎng)分化因子-9(GDF-9)表達(dá)的大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ASC)輸注治療化療性卵巢早衰(POF)大鼠的效果。方法:酶解貼壁法從大鼠脂肪中培養(yǎng)ASC,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染p EGFP-N3-GDF-9質(zhì)粒入ASC,并驗(yàn)證GDF-9表達(dá)。腹腔注射順鉑建立大鼠POF模型,1周后通過尾靜脈分別回輸ASC和ASC-GDF-9細(xì)胞,觀察大鼠體重、卵巢重量、血清中雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)和促黃體激素(LH)值,并分析卵泡形成情況。結(jié)果:ASC細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛能向成骨和脂肪細(xì)胞分化,轉(zhuǎn)染后可順利表達(dá)GDF-9蛋白,轉(zhuǎn)染效率為(43±9.68)%。順鉑腹腔注射可降低大鼠體重伴隨卵巢體積縮小,各級(jí)卵泡減少,E_2降低,FSH和LH明顯升高。輸注ASC-GDF-9細(xì)胞4次后,可顯著增加各級(jí)卵泡數(shù)目和基質(zhì)細(xì)胞密度,降低LH和FSH激素水平。結(jié)論:轉(zhuǎn)染GDF-9的ASC經(jīng)尾靜脈輸注后,可更好地改善卵巢功能,恢復(fù)各級(jí)卵泡的發(fā)育,改善激素紊亂狀態(tài)。
文內(nèi)圖片：
圖片說明： SC治療組(ASC)和ASC-GDF9治療組(ASC-GDF9)。Model組:尾靜脈注射0．5ml生理鹽水;ASC治療組:將ASC細(xì)胞以1×106/ml懸浮，按2×106/kg細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射;ASC-GDF9治療組:將轉(zhuǎn)染2天后的ASC-GDF9細(xì)胞以1×106/ml懸浮，按2×106/kg細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射。3組均注射4次，每次間隔3天。最后一次注射治療1周后，戊巴比妥麻醉大鼠，心臟取血收集血清備檢測(cè)。另收集大鼠的兩側(cè)卵巢組織修整去除脂肪后稱重照相，10%甲醛固定，脫水，石蠟包埋后，5μm切片，蘇木精-伊紅(hematoxylinandeosin，H＆E)染色，具體流程見圖2。圖1GDF-9真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定A:轉(zhuǎn)染用質(zhì)粒pEGFP-N3圖譜;B:rGDF-9基因擴(kuò)增基因電泳圖;C:pEGFP-N3-GDF9質(zhì)粒雙酶切鑒定結(jié)果圖2流程圖1．4．3血液中相關(guān)激素和GDF-9的ELISA檢測(cè)大鼠血清中E2、FSH和LH的濃度采用ELISA法檢測(cè)。另取卵巢組織，4℃預(yù)冷的PBS漂去組織血漬，濾紙吸干殘留的PBS;加冰預(yù)冷裂解液(ＲI-PA，含蛋白酶抑制劑)在4℃勻漿;將勻漿液用液氮反復(fù)凍融3次;室溫靜置30min，4℃、15000r/min離心1h，取上清，分裝，－80℃保存?zhèn)溆�。血清和組織裂解液中GDF-9濃度采用ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)。1．5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，數(shù)據(jù)以xs，

本文編號(hào)：2513395