【摘要】：目的探討晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)調(diào)控其受體促進(jìn)人股動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣化的機(jī)制。方法2014年1月—2015年3月,將股動(dòng)脈中膜平滑肌層剪成1~2 mm組織塊培養(yǎng),選取3~8代平滑肌細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將平滑肌細(xì)胞分為4組,A組單純于DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng),B組于含10 mmol/Lβ磷酸甘油鈉的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng),C、D組分別于含10 mmol/Lβ磷酸甘油鈉的DMEM培養(yǎng)基中加入20、40 mg/L AGEs,各組平滑肌細(xì)胞干預(yù)培養(yǎng)96 h。合成3對隨機(jī)AGEs受體(RAGE)siRNA,以50 nmol/L轉(zhuǎn)染C組平滑肌細(xì)胞,24 h后進(jìn)行siRNA沉默效果檢測,選取轉(zhuǎn)染效率較高的序列用于實(shí)驗(yàn)。分別取轉(zhuǎn)染前后平滑肌細(xì)胞,采用Von Kossa染色實(shí)驗(yàn)觀察平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣沉積情況,采用Western blotting法檢測RAGE、β-catenin、骨保護(hù)素(OPG)表達(dá)水平。結(jié)果未轉(zhuǎn)染的平滑肌細(xì)胞中,A組無鈣化斑塊形成,B組可見明顯的鈣化斑塊;C、D組細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核呈現(xiàn)粉紅色的數(shù)量增加,鈣化斑塊明顯增多。經(jīng)轉(zhuǎn)染后,C組平滑肌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核呈現(xiàn)粉紅色的數(shù)量較未轉(zhuǎn)染細(xì)胞減少,鈣化斑塊形成受到抑制。未轉(zhuǎn)染的各組平滑肌細(xì)胞RAGE、β-catenin、OPG表達(dá)水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其中,C組平滑肌細(xì)胞RAGE、β-catenin、OPG表達(dá)水平高于B組,D組平滑肌細(xì)胞RAGE、β-catenin、OPG表達(dá)水平高于B、C組(P0.05)。C組平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染后RAGE、β-catenin、OPG表達(dá)水平均低于轉(zhuǎn)染前(P0.01)。結(jié)論 AGEs通過與其受體結(jié)合而介導(dǎo)平滑肌細(xì)胞鈣化,其機(jī)制可能為RAGE激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,使β-catenin下游蛋白OPG表達(dá)水平升高。
[Abstract]:Objective to investigate the mechanism of advanced glycosylation end product (AGEs) regulating its receptor promoting calcification of human femoral artery smooth muscle cells. Methods from January 2014 to March 2015, the media smooth muscle layer of thigh artery was cut into 1 鈮，

本文編號(hào)：2487509