【摘要】：目的:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種常見(jiàn)的慢性自身免疫性關(guān)節(jié)疾病,其致病原因及病理過(guò)程一直是研究熱點(diǎn)。為研究氧化應(yīng)激狀態(tài)特別是谷氨酰半胱氨酸連接酶對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病過(guò)程的影響,我們采用適當(dāng)方法對(duì)谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞單位和調(diào)節(jié)亞單位在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)的改變進(jìn)行分析,以說(shuō)明氧化應(yīng)激在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的意義。方法:采集類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者及健康對(duì)照清晨空腹靜脈血,采用免疫比濁法檢測(cè)RF、CRP、C3、C4、Ig G、Ig A、Ig M,儀器法檢測(cè)血沉,ELISA法檢測(cè)抗CCP抗體;使用Ficoll Hypaque淋巴細(xì)胞分層液密度梯度離心分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,提取外周血淋巴細(xì)胞RNA,反轉(zhuǎn)錄,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)谷氨酰半胱氨酸連接酶的催化亞基和調(diào)節(jié)亞基的基因表達(dá)水平進(jìn)行分析,以溶解曲線驗(yàn)證實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增特異性。結(jié)果:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者組實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)表現(xiàn),抗CCP抗體、RF、CRP、血沉升高,C4降低,Ig G升高。與對(duì)照組相比較,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人外周血淋巴細(xì)胞中的谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞基基因和調(diào)節(jié)亞基基因表達(dá)明顯下降(谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞基基因:RA組1±0.018,對(duì)照組3.62±0.429;p0.01。谷氨酰半胱氨酸連接酶調(diào)節(jié)亞基基因:RA組1±0.03,對(duì)照組2.97±0.467;p0.01)。結(jié)論:谷氨酰半胱氨酸連接酶的催化亞基和調(diào)節(jié)亞基在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的疾病過(guò)程中發(fā)生明顯的改變,其基因表達(dá)水平明顯下降,說(shuō)明谷胱甘肽代謝及機(jī)體的氧化應(yīng)激狀態(tài)可能在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的疾病過(guò)程中扮演重要的角色,并可將其作為研究類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療的一個(gè)方向。
[Abstract]:Aim: rheumatoid arthritis (RA) is a common chronic autoimmune joint disease. In order to study the effects of oxidative stress, especially glutamylcysteine ligase, on the disease process of rheumatoid arthritis, We analyzed the changes of glutamylcysteine ligase catalytic subunit and regulatory subunit in patients with rheumatoid arthritis by appropriate methods to illustrate the significance of oxidative stress in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. Methods: fasting venous blood samples were collected from patients with rheumatoid arthritis and healthy controls in the early morning. RF,CRP,C3,C4,Ig G, IgA, IgM, erythrocyte sedimentation rate (ESR) and anti-CCP antibody were detected by immunoturbidimetric assay, instrument method and anti-CCP antibody respectively. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated by density gradient centrifugation of Ficoll Hypaque lymphocytes, and reverse transcription of RNA, was extracted from peripheral blood lymphocytes. The gene expression levels of catalytic subunits and regulatory subunits of glutamylcysteine ligase were analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR, and the specificity of real-time fluorescence quantitative PCR amplification was verified by dissolution curve. Results: the laboratory data of patients with rheumatoid arthritis showed that anti-CCP antibody, RF,CRP, erythrocyte sedimentation rate (ESR) increased and C4 decreased, Ig G increased. Compared with the control group, The expression of glutamylcysteine ligase catalytic subunit gene and regulatory subunit gene in peripheral blood lymphocytes of rheumatoid arthritis patients was significantly decreased (glutamylcysteine ligase catalytic subunit gene: RA group 1 鹵0.018, P < 0.01). The control group was 3.62 鹵0.429; P0.01. Glutamylcysteine ligase regulatory subunit gene: 1 鹵0.03 in RA group and 2.97 鹵0.467 in control group (P < 0.01). Conclusion: the catalytic subunits and regulatory subunits of glutamylcysteine ligase have obvious changes in the disease process of rheumatoid arthritis patients, and the gene expression level of glutamylcysteine ligase is significantly decreased. It is suggested that glutathione metabolism and oxidative stress may play an important role in the pathogenesis of rheumatoid arthritis and may be used as a research direction in the treatment of rheumatoid arthritis.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R593.22

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2451939