【摘要】：背景:在類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)的發(fā)病機理中,氧化應(yīng)激性反應(yīng)是一個重要因素致病因素,由于RA患者關(guān)節(jié)疼痛和功能受限等原因,患者需要長期治療,改變了生活方式,使機體處于應(yīng)激狀態(tài),出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化反應(yīng),增加了氧自由基(oxygen free radical,ROS)的生成,ROS在機體蓄積,引起機體損傷。目前,在RA動物模型的制備中,利用弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant,FCA)制備佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型較為常用,因為在形態(tài)學(xué)上和RA改變相似,而且造模較為簡單,因此,該模型常用于篩選RA藥物。錳超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)是重要的金屬抗氧化酶,存在于真核細胞線粒體中,可以將超氧陰離子自由基(superoxide anion free radical)(O.-)2特異性的轉(zhuǎn)化為H2O2和O2,由于線粒體不僅是機體細胞中氧化磷酸化代謝和產(chǎn)生能量的場所,而且是自由基產(chǎn)生的重要場所,因此,在抗氧化損傷中線粒體作用顯著。同時,在機體的線粒體中,存在去乙酰化酶(sirtuins,SIRTs)家族中的去乙�；�3(Sirtuin 3,SIRT3),SIRT3具有去乙酰化酶活性,在調(diào)節(jié)機體的線粒體能量代謝和抗氧化應(yīng)激中具有作用。白藜蘆醇(resveratrol,Res)是多酚類化合物,屬于植物抗毒素,文獻報道Res具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等功能,本研究體外探討Res對RA是否具有抗氧化作用及與線粒體MnSOD-SIRT3信號通路的關(guān)系。目的:觀察佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀況,關(guān)節(jié)滑膜組織中錳超氧化物歧化酶(MnSOD)、去乙�；�3(SIRT3)的表達,體外培養(yǎng)滑膜細胞,檢測Res對低過氧化氫(hydrogen peroxide,H2O2)誘導(dǎo)的成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖的影響,探討線粒體MnSOD-SIRT3信號通路在Res抑制AA大鼠FLS改變中的作用。方法:10只SD大鼠足趾皮下注射0.1ml弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant,FCA)誘導(dǎo)AA,另取10只大鼠,皮下注射等量磷酸緩沖鹽溶液(phosphate-buffered saline,PBS)作為對照組;造模后d 28,股動脈放血處死大鼠,留取血清,應(yīng)用分光光度計,檢測兩組大鼠機體的氧化應(yīng)激指標,硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法檢測丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、羥胺法檢測超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶(glutathion peroxidase,GSH-Px)活性;HE染色觀察兩組大鼠踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)變化;免疫組織化學(xué)法SP法觀察兩組滑膜組織中去乙�；�3(SIRT3)、錳超氧化物歧化酶(MnSOD)蛋白的表達,并進行算機圖像分析系統(tǒng)處理測定兩種蛋白的平均光密度(optical density,OD)值。體外研究,組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠滑膜細胞,羊抗大鼠血管細胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecular-1,VCAM-1)多克隆抗體鑒定,CCK-8法觀察Res對低濃度(5μmol/L)的H2O2對FLS的增殖影響,Western blot檢測AA大鼠FLS的氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白SIRT3、MnSOD蛋白的表達。結(jié)果:(1)與正常組大鼠比較,AA模型大鼠血清氧化應(yīng)激指標MDA含量、GSH-PX活性、SOD活力差異均顯著(P0.01);HE染色顯示,AA模型大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織增生,炎細胞浸潤;免疫組化染色呈現(xiàn)AA模型大鼠滑膜組織呈棕黃色顆�；螯S色顆粒,計算機圖像分析結(jié)果模型組線粒體氧化應(yīng)激SIRT3、MnSOD蛋白表達增加。(2)體外實驗表明,免疫熒光染色顯示,VCAM-1多克隆抗體鑒定為成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS);隨著Res的濃度增加,低濃度H2O2處理的AA大鼠FLS增殖受抑,SIRT3、MnSOD蛋白表達降低。結(jié)論:AA模型組大鼠存在氧化應(yīng)激狀態(tài),滑膜組織呈炎性表現(xiàn),線粒體氧化應(yīng)激蛋白在AA模型大鼠中表達增加;Res可抑制低濃度H2O2處理的AA大鼠FLS增殖,降低線粒體氧化應(yīng)激蛋白SIRT3、MnSOD蛋白表達。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R593.22

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：2450834