【摘要】：【目的】探討TLR9在系統(tǒng)性紅斑狼瘡伴動(dòng)脈粥樣硬化小鼠中對(duì)腎臟損傷的作用�！痉椒ā勘緦�(shí)驗(yàn)室將降植烷腹腔注射進(jìn)Apo E-/-小鼠,誘導(dǎo)建立系統(tǒng)性紅斑狼瘡伴動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型;并在此基礎(chǔ)上腹腔注射TLR9抑制劑IRS869進(jìn)行干預(yù)后,檢測(cè)血清中的抗ds-DNA抗體水平和腎臟組織中的Ig G、補(bǔ)體C3、TLR9及TLR9通路分子和VEGF表達(dá)水平。ApoE-/-C57BL/6小鼠和C57BL/6小鼠隨機(jī)分為6組:C57BL/6+生理鹽水對(duì)照組(A組),Apo E-/-+生理鹽水對(duì)照組(B組),C57BL/6+降植烷組(C組),Apo E-/-+降植烷組(D組),C57BL/6+降植烷+IRS869組(E組),Apo E-/-+降植烷+IRS869組(F組)。高脂飲食喂養(yǎng)12周,處死動(dòng)物。取血清進(jìn)行ELISA檢測(cè)抗ds-DNA;取腎臟組織提取蛋白和RNA分別進(jìn)行Western Blot和Real-time PCR檢測(cè)TLR9及下游信號(hào)通路分子和VEGF表達(dá)情況;取腎臟組織進(jìn)行石蠟包埋,免疫熒光檢測(cè)Ig G和補(bǔ)體C3,Massion染色檢測(cè)腎臟組織纖維化程度�！窘Y(jié)果】1.免疫效應(yīng)指標(biāo)1.1血清抗ds-DNA抗體水平(1)降植烷組血清抗ds-DNA抗體水平較C57BL/6對(duì)照組明顯升高(P0.05),Apo E-/-降植烷組相較Apo E-/-對(duì)照組明顯升高(P0.05),Apo E-/-降植烷組與C57BL/6降植烷組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)降植烷+IRS869組相較降植烷組明顯下降(P0.05),Apo E-/-降植烷+IRS869組較Apo E-/-降植烷組明顯下降(P0.05)。1.2腎臟免疫熒光情況(1)直接免疫熒光顯示降植烷組、ApoE-/-降植烷組IgG在腎小球系膜毛細(xì)血管袢成明顯連續(xù)性分布,對(duì)照組偶爾可見散在顆粒狀分布,定量分析降植烷組相對(duì)于C57BL/6對(duì)照組、Apo E-/-降植烷組相對(duì)于Apo E-/-對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);間接免疫熒光顯示降植烷組、Apo E-/-降植烷組補(bǔ)體C3在腎小球系膜毛細(xì)血管袢成明顯顆粒狀分布,對(duì)照組偶爾可見散在顆粒狀分布,定量分析降植烷組相對(duì)于C57BL/6對(duì)照組、Apo E-/-降植烷組相對(duì)于Apo E-/-對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)注射TLR9抑制劑后降植烷+IRS869組、Apo E-/-降植烷+IRS869組分別相對(duì)于降植烷組、Apo E-/-降植烷組,在腎小球系膜毛細(xì)血管袢上,Ig G和補(bǔ)體C3均明顯減少,定量分析差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.TLR9信號(hào)通路各分子表達(dá)2.1腎臟TLR9及下游信號(hào)通路分子蛋白水平表達(dá)情況(1)Western-blot分析,降植烷組、Apo E-/-降植烷組TLR9、My D88、NF-κB相對(duì)對(duì)照組明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Apo E-/-降植烷組TLR9、My D88、NF-κB蛋白水平相對(duì)于降植烷組相對(duì)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)降植烷+IRS869組、Apo E-/-降植烷+IRS869組TLR9、My D88、NF-κB的蛋白水平比降植烷組、Apo E-/-降植烷組明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而與對(duì)照組相比無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.2腎臟TLR9及下游信號(hào)通路分子c DNA水平表達(dá)情況(1)PCR分析,降植烷組TLR9、NF-κB、IRF7、Ⅰ型IFN的c DNA水平比C57BL/6對(duì)照組有升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Apo E-/-降植烷組TLR9、My D88、NF-κB、IRF7、Ⅰ型IFN的c DNA水平比對(duì)照組均有明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而Apo E-/-降植烷組相對(duì)于降植烷組在TLR9、My D88、NF-κB有明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)PCR分析,降植烷+IRS869組、Apo E-/-降植烷+IRS869組TLR9、My D88、NF-κB、IRF7、Ⅰ型IFN c DNA水平相對(duì)降植烷組、Apo E-/-降植烷組明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.腎臟纖維化情況3.1腎臟Massion情況(1)降植烷組、Apo E-/-降植烷組腎臟腎小球膠原纖維相對(duì)于對(duì)照組明顯增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Apo E-/-降植烷組相對(duì)于降植烷組纖維化程度也有所升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)降植烷+IRS869組、Apo E-/-降植烷+IRS869組腎臟腎小球膠原纖維相對(duì)于降植烷組、Apo E-/-降植烷組明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),和對(duì)照組相比沒有明顯差異(P0.05)。3.2 VEGF蛋白水平表達(dá)情況(1)Western-blot分析,降植烷組、Apo E-/-降植烷組VEGF相對(duì)對(duì)照組明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Apo E-/-降植烷組相對(duì)于降植烷組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)降植烷+IRS869組、Apo E-/-降植烷+IRS869組VEGF的蛋白水平比降植烷組、Apo E-/-降植烷組明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而與對(duì)照組相比無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�！窘Y(jié)論】1.降植烷能誘導(dǎo)Apo E-/-小鼠產(chǎn)生抗ds-DNA抗體,降植烷能與Apo E基因敲除協(xié)同刺激腎臟腎小球Ig G、補(bǔ)體C3沉淀。2.抗ds-DNA抗體通過活化和結(jié)合TLR9激活下游信號(hào)通路,NF-κB核轉(zhuǎn)移,促進(jìn)VEGF生成與活化,加速了腎組織纖維化的進(jìn)程,表明TLR9介導(dǎo)了本實(shí)驗(yàn)小鼠狼瘡樣動(dòng)脈硬化腎損傷效應(yīng)。3.抑制TLR9可以逆轉(zhuǎn)SLE合并動(dòng)脈粥樣硬化腎臟纖維化。
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【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R593.241

【參考文獻(xiàn)】

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1 李榮達(dá);林玲;崔然然;;載脂蛋白E基因缺乏對(duì)C57BL/6小鼠狼瘡早期抗體產(chǎn)生的影響[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年11期

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本文編號(hào)：2444009