【摘要】：背景和目的:機(jī)體膽固醇代謝異常可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化,動(dòng)脈粥樣硬化是致心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要原因之一,嚴(yán)重危害人類健康。改革開(kāi)放以來(lái),國(guó)民膳食結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變,機(jī)體過(guò)多脂質(zhì)攝入導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常,心腦血管疾病的患病率逐年升高,研究脂質(zhì)代謝異常及其導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制從而阻止其發(fā)生發(fā)展是目前研究的重點(diǎn)。而TC(total cholesterol)和LDL-C(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)在體內(nèi)水平受到膽固醇合成和吸收的影響,臨床上他汀類藥物的主要作用是阻斷膽固醇合成過(guò)程,依折麥布的主要作用是抑制膽固醇吸收,這些藥物都是針對(duì)血脂異常的患者進(jìn)行研發(fā)的且價(jià)格昂貴、具有一定的副作用,因此不能用于早期血脂異常發(fā)生的預(yù)防。機(jī)體血脂水平與日常膳食密切相關(guān),那么從膳食因素入手進(jìn)行血脂異常的早期干預(yù)不失為一個(gè)便利可行的有效措施。既往研究證實(shí),膳食辣椒素能夠激活血管平滑肌細(xì)胞上的瞬時(shí)受體電位香草醛亞家族1(transient receptor potential vanilloid subfamily member 1,TRPV1)通道從而影響細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝,防止膽固醇在血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)堆積形成泡沫細(xì)胞,起到預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的作用。已經(jīng)證實(shí),TRPV1在腸道中也有表達(dá),且近年來(lái)有關(guān)腸道膽固醇吸收的報(bào)道逐漸增多,該過(guò)程涉及的尼曼-匹克C1型類似蛋白1(Niemann-Pick C1-Like 1,NPC1L1)、三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子G 5/8(ATP-binding cassette subfamily G 5/8,ABCG5/8)及酯酰輔酶A膽固醇�；D(zhuǎn)移酶1/2(Acy1 Coenzyme A:Cholesterol Acyltransferases,ACAT1/2)分子逐漸成為研究的熱點(diǎn)。那么激活腸道TRPV1對(duì)于腸道膽固醇吸收的影響及機(jī)制目前尚不清楚,因此本研究主要關(guān)注辣椒素激活腸道TRPV1對(duì)腸道膽固醇吸收的影響及分子機(jī)制,為膳食辣椒素調(diào)節(jié)血脂異常提供有力依據(jù)。材料與方法:整個(gè)研究分為臨床數(shù)據(jù)分析和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)。臨床數(shù)據(jù)分析以正常人群作為研究對(duì)象,分為正常膳食組和嗜辣組。基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)以C57BL/6J野生型和TRPV1-/-型小鼠作為研究對(duì)象,C57BL/6J野生型和TRPV1-/-型小鼠各隨機(jī)分為普食組(Cont組),高脂組(HFD組)和高脂加辣椒素組(Hcaps組)。1.研究嗜辣人群和正常膳食人群一般情況和血脂信息并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2.選用C57BL/6J野生型和TRPV1-/-型小鼠作為研究對(duì)象,以TRPV1激動(dòng)劑—辣椒素作為干預(yù)手段,記錄小鼠體重等基本信息。3.采用生化檢驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)血清TC、LDL-C、TG、HDL-C等生化指標(biāo)。4.利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)小鼠血清中代表腸道膽固醇吸收的標(biāo)志物,即菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇。5.選用Caco-2細(xì)胞作為研究對(duì)象,以膽固醇微膠粒為刺激因子,以TRPV1激動(dòng)劑—辣椒素、TRPV1受體拮抗劑—辣椒卓平作為干預(yù)手段,測(cè)定Caco-2細(xì)胞膽固醇外向轉(zhuǎn)運(yùn)率。6.采用蛋白免疫印跡等分子生物學(xué)技術(shù),探討PKA、LXR、NPC1L1、ABCG5/8、ACAT1/2蛋白在各組小鼠腸道中的表達(dá)情況。結(jié)果:1.正常膳食組與嗜辣組在性別、年齡、收縮壓、舒張壓、攝鹽量、腰圍、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)上比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。嗜辣組較正常膳食組總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);校正性別、年齡、收縮壓、舒張壓、攝鹽量、腰圍及體重指數(shù)(BMI)后差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.野生型小鼠各組體重之間無(wú)明顯差異;高脂組血清TC較普食組升高(P0.01),而高脂辣組TC較高脂組下降(P0.05)。TRPV1-/-型各組小鼠中高脂組較普食組體重升高(P0.05);高脂組TC較普食組升高(P0.01),而高脂辣組與高脂組TC比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.野生型小鼠干預(yù)后,高脂辣組較高脂組菜油甾醇/TC、豆甾醇/TC、β-谷甾醇/TC均下降(P0.05)。TRPV1-/-型小鼠干預(yù)后,高脂辣較高脂組菜油甾醇/TC、β-谷甾醇/TC均下降(P0.05),但高脂組較普食組豆甾醇/TC下降(P0.01)給予辣椒素干預(yù)后無(wú)明顯變化。4.Caco-2細(xì)胞膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)率結(jié)果與對(duì)照組相比,微膠粒組細(xì)胞膽固醇外向轉(zhuǎn)運(yùn)率下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);加入辣椒素干預(yù)組較微膠粒組細(xì)胞膽固醇外向轉(zhuǎn)運(yùn)率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5.腸道膽固醇代謝有關(guān)的信號(hào)分子的蛋白表達(dá)情況5.1野生型各組小鼠干預(yù)后,高脂組較普食組PKA及LXR蛋白表達(dá)上升(P0.01及P0.05),辣椒素干預(yù)后可以逆轉(zhuǎn)該變化。TRPV1-/-型各組小鼠則無(wú)上述改變。5.2野生型各組小鼠干預(yù)后,高脂組較普食組ABCG5蛋白表達(dá)上升(P0.05),給予辣椒素干預(yù)后ABCG5蛋白表達(dá)進(jìn)一步上升(P0.05);高脂組較普食組ABCG8蛋白表達(dá)下降(P0.05),辣椒素干預(yù)后ABCG8蛋白表達(dá)上升(P0.05)。TRPV1-/-型各組小鼠中高脂組較普食組ABCG5蛋白表達(dá)下降(P0.01);各組間ABCG8蛋白表達(dá)無(wú)上述趨勢(shì)。兩種類型各組小鼠NPC1L1蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。5.3野生型各組小鼠干預(yù)后,高脂組較普食組ACAT1、ACAT2蛋白表達(dá)上升(P0.05及P0.01),高脂辣組較高脂組ACAT2蛋白表達(dá)下降(P0.05)。TRPV1-/-型各組小鼠中,ACAT2蛋白表達(dá)各組間無(wú)明顯差異。結(jié)論:1.臨床數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究表明膳食辣椒素能夠降低機(jī)體血清LDL-C和TC水平。2.辣椒素激活TRPV1可降低小鼠血清中膽固醇吸收標(biāo)志物水平。3.辣椒素激活TRPV1可上調(diào)ABCG5/8,下調(diào)ACAT2,促進(jìn)腸道膽固醇外向轉(zhuǎn)運(yùn),抑制腸道膽固醇酯化,從而降低血清TC水平。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R589.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2428555