【摘要】：糖尿病已經(jīng)成為了致死率排名世界前5的疾病。近年來DM發(fā)病的人數(shù)逐年增加，，而且發(fā)病年齡有不斷降低的趨勢，DM和DCC已經(jīng)成為影響人類生活質(zhì)量的嚴(yán)重疾病。但現(xiàn)有的藥物大都有明顯的劑量依賴性或者令人難以接受的副作用，故而尋找合適的藥物來治療這一疾病已經(jīng)成為現(xiàn)階段藥物開發(fā)的重中之重。本文以糖尿病及其并發(fā)癥的靶點(diǎn)PTP1B和ALR2展開研究。 我們使用PET-30a載體構(gòu)建了人源ALR2質(zhì)粒，并于BL21(DE3)大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)。使用離子交換和活力跟蹤的方法進(jìn)行純化，得到了相對較純的人源ALR2蛋白。酶學(xué)性質(zhì)表明，當(dāng)?shù)孜餅镈L-甘油醛時(shí)，最適溫度為37℃，最適反應(yīng)時(shí)間為15min，最適反應(yīng)pH為6.2，最適離子強(qiáng)度為0.3mol/L。酶反應(yīng)動力學(xué)分析得到結(jié)論vMAX=0.064μmol·L-1·min-1，Km=0.265mmol/L。 我們以ALR2和PTP1B為靶點(diǎn)進(jìn)行天然產(chǎn)物的抑制劑篩選，得到了一味中藥地楓皮，它對ALR2和PTP1B都有較好的抑制效果，IC50值分別為59.32μg/mL和60.25μg/mL。通過對抑制類型的檢測，我們發(fā)現(xiàn)地楓皮提取物對這兩種酶的抑制類型均為競爭型。 我們通過超濾質(zhì)譜技術(shù)對地楓皮提取物中的活性成分進(jìn)行了檢測。使用Cl8色譜柱（150mm×4.6mm，5μm），流速為0.5mL/min，進(jìn)樣量為10μL,在254nm為檢測波長。洗脫體系由A相（乙腈）和B相（0.5%醋酸水）組成，梯度洗脫：0-20min20%A-20%A；20-35min20%A-38%A；35-50min38%A-45%A;50-55min45%A-60%A；55-65min60%A-75%A；65-70min75%A-85%A；70-80min85%A-100%A；80-90min100%A-100%A對地楓皮提取物進(jìn)行分離，共有26個(gè)色譜峰。 總共從地楓皮提取物中找到了7種化合物與PTP1B和ALR2都有結(jié)合作用。我們通過電噴霧離子化線性離子阱質(zhì)譜對這7種化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。其中有5種化合物有羰基存在，其余2種化合物中1種為羧酸類物質(zhì)，還有1種無法判斷。我們得出的結(jié)論是，帶有羰基的C環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物可能會成為這兩個(gè)靶點(diǎn)共同的抑制劑，帶有2位取代基的呋喃環(huán)相鄰結(jié)構(gòu)的化合物可能具有更好的抑制活性。
[Abstract]:Diabetes has become the world's top five disease fatality rate. In recent years, the number of patients with DM has increased year by year, and the age of onset has been decreasing. DM and DCC have become serious diseases affecting the quality of life of human beings. However, most of the existing drugs have obvious dose-dependent or unacceptable side effects. Therefore, finding suitable drugs to treat this disease has become the top priority of drug development. In this study, PTP1B and ALR2, the targets of diabetes mellitus and its complications, were studied. Human ALR2 plasmid was constructed using PET-30a vector and expressed in BL21 (DE3) Escherichia coli. A relatively pure human ALR2 protein was obtained by ion exchange and activity tracking. The enzymatic properties showed that when the substrate was DL- glyceraldehyde, the optimum temperature was 37 鈩

本文編號：2420976