【摘要】：背景：骨質(zhì)疏松癥是臨床常見(jiàn)的一種骨骼退行性疾病,它的發(fā)生是因?yàn)楣侵亟ǖ膭?dòng)態(tài)平衡被打破。雌激素能夠通過(guò)復(fù)雜的分子機(jī)制影響成骨細(xì)胞的功能,促進(jìn)骨改建。FGF/FGFR信號(hào)為成骨過(guò)程當(dāng)中的重要調(diào)節(jié)因子,對(duì)骨骼的發(fā)育、形成和修復(fù)過(guò)程具有重要的生理意義,成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子I型受體(FGFR1)是出生后成骨細(xì)胞表達(dá)的主要FGFRs.P90核糖體S6蛋白激酶(RSK2)是位于Raf-MEK-ERK級(jí)聯(lián)信號(hào)通路下游的一類(lèi)具有重要作用的效應(yīng)分子,可以通過(guò)多種細(xì)胞內(nèi)蛋白的磷酸化過(guò)程調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、分化和存活等。前期實(shí)驗(yàn)中,我們應(yīng)用17-p雌二醇(濃度為10-8mol/L)作用于MC3T3-E1細(xì)胞株,培養(yǎng)5天后,通過(guò)全基因組基因芯片技術(shù),發(fā)現(xiàn)FGFR1和RSK2的基因表達(dá)明顯增強(qiáng),提示FGFR1和RSK2在成骨細(xì)胞對(duì)雌激素的反應(yīng)信號(hào)調(diào)控中可能起重要作用。因此,進(jìn)一步研究雌激素作用下FGFR1與RSK2間的相互聯(lián)系及通訊對(duì)成骨細(xì)胞的影響和作用機(jī)制,可以揭示骨形成和改建的發(fā)生機(jī)理,同時(shí)也為牙槽骨的改建塑形,骨質(zhì)疏松癥及相關(guān)骨疾病的治療提供重要靶點(diǎn)。目的：本實(shí)驗(yàn)擬采用特異性FGFR1受體抑制劑PD166866,對(duì)體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細(xì)胞株施加雌激素,結(jié)合MTT、ALP、Westernblot和RT-PCR檢測(cè),以研究雌激素作用下FGFR1對(duì)成骨細(xì)胞增殖分化的作用,通過(guò)檢測(cè)通路中RSK2因子的表達(dá),確定雌激素是否通過(guò)FGFR1作用于RSK2影響成骨細(xì)胞的增殖分化,從而針對(duì)這個(gè)機(jī)制和過(guò)程制定有效的應(yīng)對(duì)策略,為相關(guān)骨疾病的治療提供新思路。方法：1.小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞系體外培養(yǎng)。2.實(shí)驗(yàn)分為四組,即空白對(duì)照組,FGFR1抑制劑(5×10-8mol/L的PD166866)組,雌激素(10-8mol/L 的 17-β雌二醇)組,雌激素(10-8mol/L的17-p雌二醇)+FGFR1抑制劑(5×10-8mol/L的PD166866)組。3.應(yīng)用MTT技術(shù)和ALP技術(shù)分別檢測(cè)四組細(xì)胞的增殖能力和分化活性。4.應(yīng)用免疫印跡技術(shù)(Western blot)分別檢測(cè)四組細(xì)胞的RSK2及其磷酸化水平和OCN的表達(dá)水平。5.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對(duì)Runx2 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。6.采用SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：1. MC3T3-E1細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好。2.細(xì)胞增殖情況(MTT)：與空白對(duì)照組相比,雌激素組細(xì)胞增殖活性增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；加入FGFR1抑制劑后,細(xì)胞增殖活性降低(P0.05)。3.細(xì)胞分化情況(堿性磷酸酶ALP)：與空白對(duì)照組相比,雌激素可增加細(xì)胞堿性磷酸酶的表達(dá)(P0.05)：加入FGFR1抑制劑后,雌激素組和非雌激素組的堿性磷酸酶活性均增加(P0.05)。4. Westernblot免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RSK2、p-RSK2及OCN蛋白表達(dá)水平：結(jié)果顯示四個(gè)組的RSK2表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異(P0.05)；17-p雌二醇作用下RSK2的磷酸化水平及OCN的表達(dá)明顯增加(P0.05); FGFR1抑制劑組的RSK2的磷酸化水平及OCN的表達(dá)也增加(P0.05)；17-p雌二醇+FGFR1抑制劑聯(lián)合刺激組與僅加入FGFR1抑制劑或雌激素組相比,RSK2的磷酸化水平及OCN蛋白表達(dá)量上調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.成骨分化相關(guān)基因Runx2的mRNA表達(dá)水平：結(jié)果顯示,17-p雌二醇作用下,Runx2的mRNA表達(dá)上調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；加入FGFR1抑制劑后,Runx2 mRNA表達(dá)水平也升高(P0.05)；17-β雌二醇+FGFR1抑制劑聯(lián)合刺激組與僅加入FGFR1抑制劑或雌激素組相比,Runx2mRNA表達(dá)增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1. FGFR1參與了雌激素作用下成骨細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)。FGFR1信號(hào)可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖,抑制分化。2.抑制FGFR1可引起RSK2磷酸化水平增高,雌激素通過(guò)FGFR1與RSK2調(diào)控成骨作用的機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R580

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 商思霞;尹琳琳;孫惠強(qiáng);賈可麗;;流體剪切力與17-β雌二醇對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞增殖活性協(xié)同作用的研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

，

本文編號(hào)：2410041