【摘要】：背景：骨質(zhì)疏松癥是臨床常見的一種骨骼退行性疾病,它的發(fā)生是因為骨重建的動態(tài)平衡被打破。雌激素能夠通過復雜的分子機制影響成骨細胞的功能,促進骨改建。FGF/FGFR信號為成骨過程當中的重要調(diào)節(jié)因子,對骨骼的發(fā)育、形成和修復過程具有重要的生理意義,成纖維細胞生長因子I型受體(FGFR1)是出生后成骨細胞表達的主要FGFRs.P90核糖體S6蛋白激酶(RSK2)是位于Raf-MEK-ERK級聯(lián)信號通路下游的一類具有重要作用的效應分子,可以通過多種細胞內(nèi)蛋白的磷酸化過程調(diào)節(jié)細胞的分裂、分化和存活等。前期實驗中,我們應用17-p雌二醇(濃度為10-8mol/L)作用于MC3T3-E1細胞株,培養(yǎng)5天后,通過全基因組基因芯片技術(shù),發(fā)現(xiàn)FGFR1和RSK2的基因表達明顯增強,提示FGFR1和RSK2在成骨細胞對雌激素的反應信號調(diào)控中可能起重要作用。因此,進一步研究雌激素作用下FGFR1與RSK2間的相互聯(lián)系及通訊對成骨細胞的影響和作用機制,可以揭示骨形成和改建的發(fā)生機理,同時也為牙槽骨的改建塑形,骨質(zhì)疏松癥及相關(guān)骨疾病的治療提供重要靶點。目的：本實驗擬采用特異性FGFR1受體抑制劑PD166866,對體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細胞株施加雌激素,結(jié)合MTT、ALP、Westernblot和RT-PCR檢測,以研究雌激素作用下FGFR1對成骨細胞增殖分化的作用,通過檢測通路中RSK2因子的表達,確定雌激素是否通過FGFR1作用于RSK2影響成骨細胞的增殖分化,從而針對這個機制和過程制定有效的應對策略,為相關(guān)骨疾病的治療提供新思路。方法：1.小鼠成骨細胞MC3T3-E1細胞系體外培養(yǎng)。2.實驗分為四組,即空白對照組,FGFR1抑制劑(5×10-8mol/L的PD166866)組,雌激素(10-8mol/L 的 17-β雌二醇)組,雌激素(10-8mol/L的17-p雌二醇)+FGFR1抑制劑(5×10-8mol/L的PD166866)組。3.應用MTT技術(shù)和ALP技術(shù)分別檢測四組細胞的增殖能力和分化活性。4.應用免疫印跡技術(shù)(Western blot)分別檢測四組細胞的RSK2及其磷酸化水平和OCN的表達水平。5.應用RT-PCR技術(shù)對Runx2 mRNA的表達水平進行檢測。6.采用SPSS17.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：1. MC3T3-E1細胞生長狀況良好。2.細胞增殖情況(MTT)：與空白對照組相比,雌激素組細胞增殖活性增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；加入FGFR1抑制劑后,細胞增殖活性降低(P0.05)。3.細胞分化情況(堿性磷酸酶ALP)：與空白對照組相比,雌激素可增加細胞堿性磷酸酶的表達(P0.05)：加入FGFR1抑制劑后,雌激素組和非雌激素組的堿性磷酸酶活性均增加(P0.05)。4. Westernblot免疫印跡實驗檢測RSK2、p-RSK2及OCN蛋白表達水平：結(jié)果顯示四個組的RSK2表達水平?jīng)]有顯著性差異(P0.05)；17-p雌二醇作用下RSK2的磷酸化水平及OCN的表達明顯增加(P0.05); FGFR1抑制劑組的RSK2的磷酸化水平及OCN的表達也增加(P0.05)；17-p雌二醇+FGFR1抑制劑聯(lián)合刺激組與僅加入FGFR1抑制劑或雌激素組相比,RSK2的磷酸化水平及OCN蛋白表達量上調(diào),有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.成骨分化相關(guān)基因Runx2的mRNA表達水平：結(jié)果顯示,17-p雌二醇作用下,Runx2的mRNA表達上調(diào),有統(tǒng)計學意義(P0.05)；加入FGFR1抑制劑后,Runx2 mRNA表達水平也升高(P0.05)；17-β雌二醇+FGFR1抑制劑聯(lián)合刺激組與僅加入FGFR1抑制劑或雌激素組相比,Runx2mRNA表達增加,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論：1. FGFR1參與了雌激素作用下成骨細胞活性的調(diào)節(jié)。FGFR1信號可以促進成骨細胞的增殖,抑制分化。2.抑制FGFR1可引起RSK2磷酸化水平增高,雌激素通過FGFR1與RSK2調(diào)控成骨作用的機制還有待于進一步研究。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R580

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 商思霞;尹琳琳;孫惠強;賈可麗;;流體剪切力與17-β雌二醇對MC3T3-E1細胞增殖活性協(xié)同作用的研究[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2013年01期

，

本文編號：2410041