【摘要】：目的:應用RNA干擾技術(shù)研究瞬時受體電位通道6(TRPC6)對IL-1β誘導的類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)成纖維細胞樣滑膜細胞(RA-FLS)增殖的影響。方法:RT-qPCR法檢測RA和骨關(guān)節(jié)炎(OA)患者滑膜組織中TRPC6 mRNA的表達水平。組織塊聯(lián)合酶消化法培養(yǎng)RA-FLS。流式細胞術(shù)鑒定RA-FLS。將不同濃度(0、0.25、0.5、1、2、4、8、16μg/L)的重組人IL-1β與RA-FLS共培養(yǎng)36 h,CCK-8法檢測細胞活力的改變;16μg/L的IL-1β作用RA-FLS不同時間(12、24、36、48、60、72 h),CCK-8法檢測細胞活力的改變。特異性TRPC6-siRNA轉(zhuǎn)染RA-FLS后,采用RT-qPCR和Western blotting檢測沉默效率。在IL-1β存在和不存在的條件下,CCK-8法、Ed U標記法和流式細胞術(shù)檢測TRPC6干擾組與對照組的細胞活力、Ed U陽性細胞比率和(G_2/M+S)期比率的差異。結(jié)果:RA患者滑膜組織中TRPC6的mRNA表達水平相對于OA患者明顯增加(P0.05)。TRPC6-siRNA能顯著降低RA-FLS中TRPC6 mRNA和蛋白的表達(P0.05)。IL-1β能誘導RA-FLS增殖(P0.05)。沉默TRPC6后,在IL-1β的誘導環(huán)境下,特異性干擾組RA-FLS的活力、Ed U陽性細胞比率和(G_2/M+S)期比率與空白組和對照組相比均明顯降低(P0.05),而在不含IL-1β的條件下,干擾組與空白組和對照組相比差異均無統(tǒng)計學顯著性。結(jié)論:TRPC6參與IL-1β誘導的RA-FLS增殖過程,沉默TRPC6能降低IL-1β誘導的RA-FLS增殖水平。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of transient receptor potential channel 6 (TRPC6) on proliferation of (RA) fibroblast synovial cells (RA-FLS) induced by IL-1 尾 in rheumatoid arthritis (RA) by RNA interference technique. Methods: the expression of TRPC6 mRNA in synovium of RA and (OA) patients with osteoarthritis was detected by RT-qPCR method. Culture of RA-FLS. by tissue Block combined with enzyme digestion Identification of RA-FLS. by flow cytometry Recombinant human IL-1 尾 was co-cultured with RA-FLS for 36 h to detect the change of cell viability by CCK-8 method. The changes of cell viability were detected by 16 渭 g / L IL-1 尾 -induced RA-FLS at different time points (12 ~ 24 ~ 36 / 48 ~ (60 ~ 72) h), CCK-8). After transfection of specific TRPC6-siRNA into RA-FLS, silencing efficiency was detected by RT-qPCR and Western blotting. In the presence and absence of IL-1 尾, CCK-8, Ed U labeling and flow cytometry were used to detect the difference between TRPC6 interference group and control group in the ratio of active, Ed U positive cells and G _ 2 / M _ S phase. Results: the expression of TRPC6 mRNA in synovial tissue of RA patients was significantly higher than that in OA patients (P0.05). TRPC6-siRNA could significantly decrease the expression of TRPC6 mRNA and protein in RA-FLS (P0.05). IL-1 尾 could induce RA-FLS proliferation (P0.05). After silencing TRPC6, the ratio of active, Ed U positive cells of RA-FLS and the ratio of G _ 2 / M _ S phase of RA-FLS in the specific interference group were significantly lower than those in the blank group and the control group (P0.05). But without IL-1 尾, there was no significant difference between the interference group and the blank group and the control group. Conclusion: TRPC6 is involved in RA-FLS proliferation induced by IL-1 尾, and silencing TRPC6 can decrease RA-FLS proliferation induced by IL-1 尾.
【作者單位】： 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院骨科;廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院骨科;佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院骨科;廣州醫(yī)科大學生理教研室;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81470205) 廣州市屬高校科研計劃(No.2012C043)
【分類號】：R593.22

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本文編號：2398352