發(fā)布時間：2018-12-14 23:45

【摘要】：目的:百草枯(PQ)中毒是臨床上常見的急危重癥,致死率高,并且目前尚無特效拮抗劑。肺是PQ主要損傷的靶器官,尤其肺泡上皮細胞是其特異性靶點。課題組前期的體內實驗發(fā)現,甘草酸二銨(DG)可促進急性肺損傷大鼠中糖皮質激素受體(GR)的表達,并且可抑制PQ中毒大鼠中TLR4-MyD88-NF-κB通路的過度表達,進而改善大鼠預后。本實驗以PQ誘導肺泡上皮Ⅱ型細胞(AECⅡ)建立體外模型,旨在研究GR、高遷移率族蛋白1(HMGB1)、Toll樣受體4(TLR4)、髓樣分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、生長轉化因子β1(TGF-β1)相關信號分子在PQ中毒條件下的表達變化及DG預治療對這些信號通路分子的影響及作用機制。方法:大鼠肺泡上皮Ⅱ型細胞分為6組:空白對照組(NS組)、PQ中毒組(PQ組)、DG預治療組(DG組)、PQ中毒受體阻斷組(PR組)、DG預治療受體阻斷組(PDR組)、無水乙醇對照組(NE組)。NS組:不加任何藥物干預,培養(yǎng)細胞24h;PQ組:以含1000μmol/L PQ的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞24h;DG組:先以含0.6 mg/mL DG的培養(yǎng)基培養(yǎng)2h,再以含0.6 mg/mL DG+1000μmol/L PQ的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞24h;PR組:先以含100nM RU486的培養(yǎng)基培養(yǎng)2h,再以含100nM RU486+1000μmol/L PQ的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞24h;PDR組:先以含100nM RU486的培養(yǎng)基培養(yǎng)2h,再以含100n M RU486+0.6mg/mLdg的培養(yǎng)基培2h,最后以含100nmru486+0.6mg/mldg+1000μmol/lpq的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞24h;ne組:以含0.33μ/ml無水乙醇的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞24h。以mtt檢測不同濃度的pq和dg對肺泡上皮細胞增殖的影響。倒置顯微鏡下觀察每組細胞的形態(tài)、生長狀況。rt-pcr方法檢測gr、hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65和tgf-β1的基因表達。elisa方法檢測gr、hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65、tgf-β1和tnf-α的蛋白質量濃度。結果:(1)mtt試驗中,細胞的存活率隨著pq濃度的增加而降低,在濃度為200μmol/l,400μmol/l,600μmol/l,800μmol/l,1000μmol/l和2000μmol/l的pq培養(yǎng)基對應的細胞存活率分別為(88.12±3.15)%,(81.39±3.31)%,(70.90±3.40)%,(59.80±3.15)%,(48.31±3.58)%,(31.56±3.74)%,(16.46±3.16)%,ic50的pq濃度為920.87μmol/l。(2)在dg預治療的情況下,pq誘導的肺泡上皮細胞的生存率升高,含0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml濃度dg的培養(yǎng)基對應的細胞生存率分別為(47.83±0.54)%,(51.99±1.37)%,(59.32±2.34)%,(66.40±3.26)%,(64.89±3.37)%,(60.78±2.24)%,(55.09±2.42)%,(48.72±0.40)%。(3)倒置顯微鏡下觀察發(fā)現,與ns組比較,pq組、pr組、dg組和pdr組中細胞膜出現皺縮,細胞形態(tài)不規(guī)則,細胞貼壁不良,可見細胞脫落凋亡,甚至出現細胞碎片。而dg組和pdr組中細胞損傷較pq和pr組相比明顯減輕。(4)與ns組比較,pq組和dg組中gr的水平明顯降低(均,p0.01),但hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65、tnf-α、tgf-β1的水平均有不同程度的升高(均,p0.01)。并且dg組中gr表達降低的程度小于pq組(p0.01),而dg組中hmgb1、tlr4、myd88、nf-кbp65、tnf-α、tgf-β1表達升高的程度均小于pq組(均,p0.01)。(5)加入阻滯劑RU468后,DG組與PDR組相比,PQ組與PR組相比,NS組和NE組相比,其中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-кB p65、TNF-α、TGF-β1的差異無統(tǒng)計學意義(均,P0.05)。結論:甘草酸二銨可升高GR水平,并降低HMGB1、TLR4、MyD88、NF-кB p65、TNF-α、TGF-β1水平,減輕了百草枯誘導的肺泡上皮Ⅱ型細胞的損傷,提高細胞生存率。但甘草酸二銨抗炎機制與激素不同,不受糖皮質激素受體阻斷劑影響。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R595.4

【參考文獻】

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本文編號：2379528