【摘要】：目的:建立糖尿病下肢缺血大鼠動(dòng)物模型(STZ缺血大鼠模型),導(dǎo)入質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的小凹蛋白(Caveolin-1),觀察Caveolin-1對(duì)糖尿病大鼠缺血組織中NO的影響及機(jī)制。方法:應(yīng)用STZ法構(gòu)建糖尿病大鼠,將80只糖尿病大鼠隨機(jī)分為4組(每組20只):A組為假手術(shù)對(duì)照組;B組為缺血組(單純結(jié)扎股動(dòng)脈);C組為缺血空轉(zhuǎn)染組(結(jié)扎股動(dòng)脈并轉(zhuǎn)染不含Caveolin-1的質(zhì)粒);D組為缺血轉(zhuǎn)染組(結(jié)扎股動(dòng)脈并轉(zhuǎn)染Caveolin-1),監(jiān)測(cè)各組血糖,并于轉(zhuǎn)染后14天取缺血部位肌肉組織,分別應(yīng)用Elisa法檢測(cè)各組組織中NO水平,免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)組織中Caveolin-1、e NOS的含量,應(yīng)用Image-Pro Plus(IPP)6.0圖像分析系統(tǒng)對(duì)缺血組織中Caveolin-1、e NOS進(jìn)行半定量分析,HE染色觀察組織形態(tài)及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。結(jié)果:各組血糖均高于16.8mmol/L,Elisa檢測(cè)缺血組織中NO,見(jiàn)各組均有NO的表達(dá),缺血組中NO的表達(dá)明顯低于假手術(shù)組(P0.05),缺血轉(zhuǎn)染組組織中的NO水平明顯高于其他各組(P0.05)。免疫組化半定量檢測(cè)顯示:缺血組Caveolin-1蛋白的表達(dá)較假手術(shù)組明顯增多(P0.05),e NOS的蛋白水平變化不大(P0.05),NO含量明顯減少(P0.05),缺血轉(zhuǎn)染組中的Caveolin-1、e NOS及NO的含量比其他三組明顯增多(P0.05)。HE染色見(jiàn)假手術(shù)對(duì)照組缺血組織細(xì)胞形態(tài)大致正常,無(wú)充血、水腫,缺血組組及空轉(zhuǎn)染組的腓腸肌細(xì)胞中均有多量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),且肌肉組織萎縮。轉(zhuǎn)染組炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)較少,肌肉萎縮不明顯。結(jié)論:1、在糖尿病下肢缺血模型中Caveolin-1會(huì)低濃度增加,并通過(guò)抑制e NOS/NO通路,降低NO的生成2、對(duì)糖尿病缺血大鼠人工轉(zhuǎn)染Caveolin-1使其高濃度表達(dá)時(shí)會(huì)促進(jìn)e NOS/NO通路,使NO生成增加。
[Abstract]:Aim: to establish a rat model of diabetic lower limb ischemia (STZ ischemia rat model) and introduce plasmid transfected concave protein (Caveolin-1) to observe the effect and mechanism of Caveolin-1 on NO in ischemic tissue of diabetic rats. Methods: STZ method was used to construct diabetic rats. 80 diabetic rats were randomly divided into 4 groups (20 rats in each): A group as sham-operation control group, B group as ischemia group (simple ligation of femoral artery), 20 rats in each group as sham-operation control group). Group C was treated with ischemia and empty transfection (ligation of femoral artery and transfection of plasmids without Caveolin-1). Group D was treated with ischemia transfection (ligation of femoral artery and transfection of Caveolin-1). Blood glucose was monitored in each group. Muscle tissue of ischemic area was taken 14 days after transfection. NO level in each group was detected by Elisa method. Immunohistochemical staining was used to detect the content of Caveolin-1,e NOS in tissues, and Image-Pro Plus (IPP) 6.0 image analysis system was used to analyze Caveolin-1,e NOS in ischemic tissues. Tissue morphology and inflammatory cell infiltration were observed by HE staining. Results: the expression of NO in ischemic tissues was detected by Elisa with blood glucose higher than 16.8 mmol / L in all groups. The expression of NO in ischemic group was significantly lower than that in sham operation group (P0.05), and the expression of NO in ischemic group was significantly lower than that in sham operation group (P0.05). The level of NO in ischemic transfection group was significantly higher than that in other groups (P0.05). Immunohistochemical semi-quantitative analysis showed that the expression of Caveolin-1 protein in ischemic group was significantly higher than that in sham operation group (P0.05), e NOS protein level was not changed (P0.05), NO content was significantly decreased (P0.05). The contents of Caveolin-1,e NOS and NO in the ischemic transfection group were significantly higher than those in the other three groups (P0.05). HE staining showed that the morphology of ischemic tissue cells in the sham-operation control group was approximately normal without hyperemia and edema. Many inflammatory cells were infiltrated in gastrocnemius muscle cells in ischemia group and empty transfection group, and muscle tissue atrophy. In the transfection group, the inflammatory cells invaded less and the muscle atrophy was not obvious. Conclusion: 1. In the diabetic model of lower extremity ischemia, the low concentration of Caveolin-1 was increased, and the formation of NO was decreased by inhibiting the e NOS/NO pathway. Artificial transfection of Caveolin-1 into diabetic ischemic rats promoted e NOS/NO pathway and increased NO production.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2

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本文編號(hào)：2367548