發(fā)布時間：2018-11-27 18:58

【摘要】：硬酯酰輔酶A去飽和酶1(SCD1)主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,在調(diào)節(jié)脂代謝以及胰島素敏感性方面起到重要作用。相關(guān)文獻報道,全身性SCD1(-/-)敲除的ob/ob小鼠,雖然胰島素敏感性顯著改善,但胰島功能出現(xiàn)嚴重損傷,即胰島素合成及分泌嚴重不足,具體分子機制不清[1]。因此,本文旨在探究SCD1在胰島β細胞功能和存活方面的作用,并探索相關(guān)的調(diào)節(jié)機制。首先,在大鼠胰島β細胞系INS-1中運用RNA干擾技術(shù),降低細胞內(nèi)SCD1的表達,進而進行高鉀刺激的胰島素分泌實驗(KSIS)并檢測胰島素含量。結(jié)果表明,干擾SCD1的表達,其KSIS功能和胰島素含量均顯著下降。接著,在INS-1細胞中過表達或干擾SCD1,檢測胰島β細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),過表達SCD1顯著增加肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A基因(MafA)的蛋白表達水平;干擾SCD1顯著抑制MafA的蛋白表達水平,但SCD1對MafA的mRNA水平并無明顯影響。進一步研究表明,SCD1通過其組氨酸盒與MafA相互作用,避免MafA蛋白降解,從而增加MafA的蛋白穩(wěn)定性。病理學刺激物如衣霉素或炎癥因子IL-1β作用胰島β細胞,濃度依賴性降低SCD1以及MafA的蛋白表達水平。更為重要的是,過表達SCD1能夠逆轉(zhuǎn)衣霉素或IL-1β引起的MafA蛋白水平降低。IL-1β不僅明顯降低SCD1與MafA之間的相互作用,且增加MafA的泛素化水平。過表達SCD1不僅能夠部分取消IL-1β所引起的MafA泛素化修飾水平的增加,且能夠逆轉(zhuǎn)IL-1β所造成的INS-1細胞KSIS功能以及胰島素含量的降低。綜上所述,本研究揭示了,基礎(chǔ)狀態(tài)下SCD1通過與轉(zhuǎn)錄因子MafA相互作用增加MafA的蛋白穩(wěn)定性。損傷因素刺激下,由于SCD1與MafA的相互作用減弱,MafA泛素化修飾增加導致蛋白穩(wěn)定性降低,進而造成胰島β細胞功能障礙。本研究豐富了人們對SCD1在胰島β細胞中的生物學功能的認識,為糖尿病的治療提供了新的治療靶點與理論依據(jù)。
[Abstract]:Desaturase 1 (SCD1) is mainly located on the endoplasmic omentum and plays an important role in regulating lipid metabolism and insulin sensitivity. It has been reported that the insulin sensitivity of ob/ob mice knockout with systemic SCD1 (- / -) is significantly improved, but the islet function is seriously damaged, that is, the synthesis and secretion of insulin is seriously inadequate, and the specific molecular mechanism is unclear [1]. Therefore, the purpose of this study is to explore the role of SCD1 in the function and survival of islet 尾 cells and to explore the related regulatory mechanisms. Firstly, RNA interference technique was used to reduce the expression of SCD1 in rat islet 尾 cell line INS-1, and then the hyperkalemic insulin secretion experiment (KSIS) was carried out and the insulin content was measured. The results showed that the KSIS function and insulin content decreased significantly after interfering with the expression of SCD1. Then, overexpression or interference of SCD1, in INS-1 cells was used to detect the expression of specific transcription factors in islet 尾 cells. The results showed that overexpression of SCD1 significantly increased the expression of (MafA) of oncogene homologue A in fibrosarcoma of tendon, interfered with SCD1 significantly inhibited the expression of MafA, but SCD1 had no significant effect on the mRNA level of MafA. Further studies showed that SCD1 could avoid the degradation of MafA protein and increase the protein stability of MafA by interacting with MafA by its histidine box. The expression of SCD1 and MafA protein was decreased in a dose-dependent manner by pathological stimulators such as chlortetracycline or inflammatory factor IL-1 尾. More importantly, overexpression of SCD1 could reverse the decrease of MafA protein level induced by SCD1 or IL-1 尾. IL-1 尾 not only decreased the interaction between SCD1 and MafA, but also increased the level of MafA ubiquification. Overexpression of SCD1 could not only partially cancel the increase of MafA ubiquitin modification induced by IL-1 尾, but also reverse the decrease of KSIS function and insulin content of INS-1 cells induced by IL-1 尾. In conclusion, this study revealed that SCD1 enhances the protein stability of MafA by interacting with transcription factor MafA. Under the stimulation of injury factors, the interaction between SCD1 and MafA was weakened, and the increase of MafA ubiquitin modification led to the decrease of protein stability, which resulted in the dysfunction of islet 尾 cells. This study enriches the understanding of the biological function of SCD1 in islet 尾 cells and provides a new therapeutic target and theoretical basis for the treatment of diabetes mellitus.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

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本文編號：2361740