【摘要】：研究目的明確尾加壓素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)和它的特異性受體GPR14的高表達(dá)與人糖尿病大動(dòng)脈病變的相關(guān)性,比較尾加壓素Ⅱ及其受體GPR14在糖尿病人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞與非糖尿病入主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中的差異性表達(dá),探尋糖尿病大動(dòng)脈病變預(yù)防及治療的新靶點(diǎn)、新途徑。研究方法實(shí)驗(yàn)取臨床心外科大血管手術(shù)或冠狀動(dòng)脈旁路移植手術(shù)中收集的主動(dòng)脈組織,用組織塊貼壁法培養(yǎng)人主動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞,形態(tài)學(xué)和免疫熒光法對(duì)血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定,傳代后選取第3-6代細(xì)胞備用。根據(jù)病人是否有糖尿病將取自標(biāo)本培養(yǎng)的細(xì)胞分為糖尿病組和非糖尿病組,糖尿病組病人糖尿病史1年以上、平素血糖控制欠規(guī)律,術(shù)前平均血糖在11.1mmol/L以上,非糖尿病組病人術(shù)前平均血糖在正常范圍(3.9-6.1mmol/L)。根據(jù)不同處理,糖尿病組和非糖尿病組再分別分為UⅡ組、UT拮抗組、對(duì)照組,分別給予UⅡ, UT拮抗劑、對(duì)照處理24h。采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)UⅡ和UT拮抗劑對(duì)糖尿病和非糖尿病平滑肌細(xì)胞遷移的差異性影響；CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞增殖程度進(jìn)行對(duì)比,明確UⅡ?qū)μ悄虿『头翘悄虿∑交〖?xì)胞促增殖作用的差別；提取各組細(xì)胞總蛋白和總mRNA分別行western blot和R T-PCR,明確糖尿病人和非糖尿病人血管平滑肌細(xì)胞中UⅡ和GPR14的差異性表達(dá)。所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果1.應(yīng)用組織塊貼壁法培養(yǎng)出人主動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞,傳代后進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,見細(xì)胞呈梭形或長梭形,可重疊生長,高低不平,呈典型的“峰-谷”樣,這是血管平滑肌細(xì)胞特征性生長方式；免疫熒光鑒定：抗α平滑肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白(抗α-SMA)見細(xì)胞胞漿顯示綠色熒光,且純度在90%以上。2.CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)①隨著時(shí)間的推移,各組OD值在一定范圍內(nèi)逐漸升高；②在糖尿病組(以下簡(jiǎn)稱DM組)中,糖尿病UⅡ處理組(以下簡(jiǎn)稱UⅡ+DM組)在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖活性均顯著高于糖尿病UⅡ受體拮抗組(以下簡(jiǎn)稱UT+DM組)(P0.01)和糖尿病對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱DM對(duì)照組)(P0.01),UT+DM組細(xì)胞增值活性低于DM對(duì)照組(P0.05)；③在正常組中,UⅡ處理組(以下簡(jiǎn)稱UⅡ+正常組)在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖活性均高于無糖尿病的UⅡ受體拮抗組(以下簡(jiǎn)稱UT+正常組)(P0.05)和正常對(duì)照組(P0.05),UT+正常組與正常對(duì)照組無顯著差別(P0.05)；④在各時(shí)間點(diǎn),經(jīng)UⅡ處理的DM組的細(xì)胞增殖活性高于UⅡ處理的正常組(P0.05)。3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)①在糖尿病組中,UⅡ+DM組的細(xì)胞遷移距離顯著大于UT+DM組(P0.01)和DM對(duì)照組(P0.01), UT+DM組小于DM對(duì)照組(P0.05)：②在正常組中,UⅡ+正常組的細(xì)胞平均遷移距離大于UT+正常組(P0.05)和正常對(duì)照組(P0.05),UT+正常組與正常對(duì)照組無顯著差別(P0.05)；③在糖尿病組和正常組之間,UⅡ+D M組的細(xì)胞遷移距離大于UⅡ+正常組(P0.05)。4.免疫印跡(Western blot)和RT-PCR①在糖尿病組內(nèi), UII+DM組中UⅡ和其受體GPR14的蛋白表達(dá)量和mRNA表達(dá)量顯著高于UT+DM組(P0.01)和DM對(duì)照組(P0.01), UT處理組UⅡ及其受體GPR14的蛋白表達(dá)量和nRNA表達(dá)量低于DM對(duì)照組(P0.05);②正常組內(nèi),UⅡ和其受體GPR14的蛋白表達(dá)量和mRNA表達(dá)量在UⅡ+正常組中的表達(dá)量也高于UT+正常組(P0.05)和正常對(duì)照組(P0.05),而它們?cè)赨T+正常組中的表達(dá)量與在正常對(duì)照組中的表達(dá)量并無顯著差異(P0.05)；③UⅡ+DM組平滑肌細(xì)胞中UⅡ及其受體GPR14的蛋白表達(dá)量和mRNA表達(dá)量高于UⅡ+正常組(P0.05)。結(jié)論1.從全新的角度進(jìn)一步證實(shí)UⅡ及其受體GPR14的高表達(dá)與人平滑肌細(xì)胞增殖、遷移密切相關(guān)。2.糖尿病人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)UⅡ的敏感性高于非糖尿病人,更易發(fā)生遷移和增殖,從而更容易導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生,且糖尿病人的動(dòng)脈粥樣硬化比非糖尿病人的動(dòng)脈粥樣硬化病變程度重、范圍大。此過程是通過GPR14介導(dǎo)的第二信使通路發(fā)揮復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)所致。3.除了“尾加壓素Ⅱ-GPR14”系統(tǒng)外,可能還存在其他因子通過其他通路或途徑促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移,從而加快動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。4.SB-657510作為一種磺胺類UⅡ受體拮抗劑,能顯著抑制人動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移,延緩人糖尿病大血管病的進(jìn)展,對(duì)糖尿病人的動(dòng)脈粥樣硬化具有一定的防治作用,具有廣闊的抗動(dòng)脈粥樣硬化研究和應(yīng)用前景。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張勇剛,陳亞紅,馬春艷,齊永芬,龐永正,楊軍,張肇康,唐朝樞;尾加壓素Ⅱ的促絲裂作用[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2001年01期

，

本文編號(hào)：2357363