本文關(guān)鍵詞：津力達(dá)顆粒對高脂誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞胰島素抵抗影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2015年

津力達(dá)顆粒對高脂誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞胰島素抵抗影響的研究

段力園  

【摘要】：胰島素抵抗(IR)是2型糖尿病及多種代謝性疾病的共同病理生理基礎(chǔ)。而氧化應(yīng)激是引起IR的關(guān)鍵性因素。既往有研究表明,復(fù)方制劑津力達(dá)(由人參、黃精、蒼術(shù)、苦參等17味中藥組成)可有效降血糖,改善2型糖尿病患者的癥狀,并具有保護胰島β細(xì)胞、增加胰島素分泌、改善IR的作用。但其具體機制尚不明確,本研究擬通過觀察津力達(dá)在體外細(xì)胞水平對高脂誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞IR的影響,探討其改善IR的機制,為臨床用藥提供理論依據(jù)。目的:觀察中藥復(fù)方制劑津力達(dá)對高脂誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞胰島素抵抗以及氧化應(yīng)激的影響,探討津力達(dá)改善胰島素抵抗的機制。方法:采用高脂(含0.25 mmol/L棕櫚酸培養(yǎng)基)干預(yù)法建立Hep G2細(xì)胞胰島素抵抗模型。Hep G2細(xì)胞隨機分為2組,正常對照組和高脂培養(yǎng)基組,分別干預(yù)24小時后采用葡萄糖氧化酶法測定培養(yǎng)基中葡萄糖濃度,計算葡萄糖攝取率,判斷造模成功。造模成功后將高脂培養(yǎng)基組隨機分為5組,即高脂對照組(PA)、二甲雙胍培養(yǎng)基組(Met)(二甲雙胍濃度為0.2 mg/m L)、津力達(dá)低劑量組(JLD-L)(津力達(dá)濃度為0.75 mg/m L)、津力達(dá)中劑量組(JLD-M)(津力達(dá)濃度為1.5 mg/m L)和津力達(dá)高劑量組(JLD-H)(津力達(dá)濃度為3.0 mg/m L),同時設(shè)立正常培養(yǎng)基對照組(Con),二甲雙胍為陽性藥物對照。分別干預(yù)48小時后收集細(xì)胞,采用相應(yīng)試劑盒測定各組Hep G2細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo),即還原型谷胱甘肽(GSH)、脂質(zhì)過氧化物(LPO)的含量,過氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性;DHE熒光染色檢測Hep G2細(xì)胞活性氧簇(ROS)的含量;Real-Time PCR檢測Hep G2細(xì)胞胰島素信號通路上胰島素受體(INSR)、胰島素受體底物-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶β(AKT)和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(GLUT2)的m RNA表達(dá)水平;Western Blot檢測Hep G2細(xì)胞PI3K總蛋白表達(dá)水平,以及IRS-1、AKT、c-jun氨基末端激酶(JNK)、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的總蛋白及磷酸化蛋白水平。結(jié)果:1 Hep G2細(xì)胞的胰島素抵抗體外模型建立Hep G2細(xì)胞培養(yǎng)24小時后PA組培養(yǎng)基中葡萄糖含量較Con組高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),胰島素敏感性下降,表明用軟脂酸誘導(dǎo)胰島素抵抗體外細(xì)胞模型成功建立。2 MTT法檢測干預(yù)對Hep G2細(xì)胞增殖的影響與Con組相比,PA組分別干預(yù)24h、48h能夠使Hep G2細(xì)胞抑制率升高,增值率下降(P0.05);與PA組相比,Met、JLD-L、JLD-M、JLD-H均能提高Hep G2細(xì)胞增值率(P0.05),但未能恢復(fù)至Con組水平。3 Hep G2細(xì)胞胰島素敏感性的變化(1)胰島素信號通路相關(guān)指標(biāo)基因表達(dá)水平的變化與Con組相比,PA組Hep G2細(xì)胞INSR、IRS-1、PI3K、AKT、GLUT2的m RNA表達(dá)下降(P0.05);與PA組相比,JLD-L、JLD-M干預(yù)上調(diào)IRS-1、AKT、GLUT2的m RNA表達(dá)(P0.05),而對INSR、PI3K無明顯影響(P0.05);Met以及JLD-H均可上調(diào)INSR、IRS-1、PI3K、AKT、GLUT2的m RNA表達(dá)(P0.05),但未能恢復(fù)至Con組水平。(2)胰島素信號通路相關(guān)指標(biāo)蛋白表達(dá)水平的變化與Con組相比,PA組p-IRS-1/IRS-1比值顯著升高,p-AKT/AKT、PI3K/β-actin比值顯著降低(P0.05);與PA組相比,Met、JLD-M、JLD-H干預(yù)組p-IRS-1/IRS-1比值顯著降低,p-AKT/AKT、PI3K/β-actin比值顯著增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),JLD-L干預(yù)雖能降低p-IRS-1/IRS-1比值,但未能提高p-AKT/AKT、PI3K/β-actin比值。4 Hep G2細(xì)胞氧化應(yīng)激行DHE熒光染色顯示,與Con組相比,PA組的細(xì)胞核內(nèi)的紅色熒光明顯增強,表示細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯增加;不同濃度的津力達(dá)及二甲雙胍干預(yù)可以顯著減少紅色熒光強度,減少ROS生成。Hep G2細(xì)胞經(jīng)高脂孵育后,抗氧化酶GSH-Px、T-SOD、CAT的活性均較Con組下降(P0.05),GSH含量降低(P0.05),LPO含量明顯增加(P0.05),藥物干預(yù)后,Met、JLD-L、JLD-M、JLD-H組LPO含量較PA組減少(P0.05),T-SOD、GSH-Px、CAT活性以及GSH含量較PA組增高(P0.05),但藥物干預(yù)組組間沒有明顯差異(P0.05)。5 JNK、p38MAPK信號通路與Con組相比,PA組p-JNK/JNK和p-p38MAPK/p38MAPK比值顯著升高(P0.05);與PA組相比,津力達(dá)各個濃度組及二甲雙胍干預(yù)可使p-JNK/JNK和p-p38MAPK/p38MAPK比值顯著降低(P0.05),但二甲雙胍能使上述比值恢復(fù)至正常水平,與對照組無顯著差異(P0.05)。結(jié)論:1津力達(dá)作用于胰島素信號通路,減輕Hep G2細(xì)胞的胰島素抵抗。2津力達(dá)改善Hep G2細(xì)胞氧化應(yīng)激,減少ROS生成,降低LPO含量,恢復(fù)抗氧化酶如SOD、GSH-Px、CAT活性,增加GSH含量。3津力達(dá)抑制肝臟JNK、p38MAPK應(yīng)激信號通路,恢復(fù)Hep G2細(xì)胞胰島素信號傳導(dǎo)�？傊�,津力達(dá)可改善高脂誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞胰島素敏感性,可能是通過抑制JNK和p38MAPK信號通路,降低Hep G2細(xì)胞氧化應(yīng)激實現(xiàn)的。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1
【目錄】：

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