發(fā)布時(shí)間：2018-11-22 18:00

【摘要】：胰島素抵抗是指機(jī)體外周靶組織對(duì)生理濃度的胰島素反應(yīng)降低,引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生補(bǔ)償性地胰島β細(xì)胞增強(qiáng)其分泌,導(dǎo)致血液中胰島素含量高于正常范圍。胰島素抵抗(IR)與β細(xì)胞的胰島素分泌功能減弱是引發(fā)Ⅱ型糖尿病發(fā)生發(fā)展的兩大關(guān)鍵因素�，F(xiàn)今研究結(jié)果顯示,IR是比二型糖尿病發(fā)生發(fā)展的更為早期的機(jī)體生理異常。它在促使二型糖尿病形成過程中具有不可替代的作用�？咕�(antimicrobial peptides)是由生物體自身免疫防御系統(tǒng)進(jìn)行非特異性應(yīng)答而合成的為對(duì)抗外源病原體以及惡性細(xì)胞的一類小分子活性肽類的總稱。其具備的功能特征主要有抗菌譜范圍廣、熱平穩(wěn)性能強(qiáng)、分子質(zhì)量小以及免疫原性低等。AWRK6(SWVGKHGKKFGLKKHKKH)是本實(shí)驗(yàn)室在前期研究中將東北林蛙皮膚抗菌肽Dybowskin-2CDYa優(yōu)化改造得到的新型活性肽,與Dybowskin-2CDYa相比穩(wěn)定性更佳。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果表明,AWRK6和Exendin4在促胰島素分泌的發(fā)生機(jī)制方面具有相似性,二者能夠有效地促胰島素的分泌,降糖效果明顯。因此,AWRK6有望成為新一代高效、安全治療Ⅱ型糖尿病的新型藥物。近年來有報(bào)道表明,Exendin4緩解生物體內(nèi)對(duì)胰島素產(chǎn)生抵抗的狀況,且能增強(qiáng)機(jī)體組織對(duì)胰島素的敏感性。為探究AWRK6是否對(duì)胰島素抵抗具有抑制作用,本文選定了HepG2細(xì)胞和AWRK6作為本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象,應(yīng)用高濃度胰島素對(duì)HepG2進(jìn)行體外誘導(dǎo)的方法來創(chuàng)建胰島素抵抗模型,采用葡萄糖氧化酶法、甘油三酯酶法以及MTT方法等來初步分析鑒定AWRK6的最佳作用濃度以及其對(duì)該胰島素抵抗模型的作用。其中,通過檢測(cè)模型細(xì)胞對(duì)葡萄糖消耗量以及其TG合成量,研究結(jié)果表明AWRK6能夠使模型細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗量顯著提高且細(xì)胞內(nèi)TG合成量亦顯著增加,即AWRK6能夠?qū)σ葝u素抵抗產(chǎn)生抵抗作用。為進(jìn)一步研究AWRK6在體內(nèi)是否也具有抑制胰島素抵抗的作用,通過連續(xù)兩次小劑量注射鏈脲佐菌素(STZ)方法來構(gòu)建小鼠胰島素抵抗模型。模型小鼠經(jīng)AWRK6作用后,運(yùn)用OGTT實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠機(jī)體對(duì)葡萄糖的耐受能力進(jìn)行測(cè)定。并結(jié)合ELISA分別檢測(cè)AWRK6對(duì)小鼠血漿中胰島素含量以及小鼠肝臟和肌肉中TG、TC、糖原含量變化的影響。結(jié)果顯示,與空白對(duì)照模型組小鼠相比,腹腔注射濃度為100nM AWRK6的小鼠血漿中胰島素含量顯著降低;其葡萄糖耐受能力也有所緩解;肝臟以及肌肉中TG、TC、以及相應(yīng)的糖原合成含量顯著增加。結(jié)果表明在體內(nèi)AWRK6對(duì)胰島素抵抗同樣具有抑制作用。我們提取了模型小鼠肌肉中的總蛋白,運(yùn)用蛋白印記法(Western Blot)方法,測(cè)定AWRK6對(duì)PKB、PI3K和GLUT4蛋白表達(dá)量的影響。發(fā)現(xiàn)AWRK6處理的小鼠肌肉中GLUT4、PI3K、PKB的表達(dá)量都顯著增加。研究結(jié)果表明AWRK6能夠上調(diào)GLUT4、PI3K、PKB的蛋白表達(dá)量,促進(jìn)GLUT4合成及轉(zhuǎn)位,從而抑制了胰島素抵抗。本文研究結(jié)果表明AWRK6具有抑制胰島素抵抗作用并初步闡明了作用機(jī)制,為其進(jìn)一步的臨床藥物研發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2350138