【摘要】：目的:探討PTEN與人主動脈血管平滑肌細(xì)胞(HASMC)鈣化的潛在關(guān)系,明確PTEN是否能夠介導(dǎo)AGEs促進(jìn)HASMC的鈣化。方法:用不同濃度AGEs(25mg/L、50mg/L、100mg/L)分別作用于三組人主動脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng),設(shè)正常條件下(91%DMEM高糖培養(yǎng)基+6%胎牛血清+2%生長因子+1%雙抗)培養(yǎng)的HASMC為一空白對照組,培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白,采用western blotting檢測各組人主動脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平,各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。為明確PTEN是否參與了AGEs促進(jìn)HASMC鈣化的過程,給予不同濃度(0mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)及不同時間長度(0h、12h、24h、48h)AGEs干預(yù)細(xì)胞后,Western blot檢測HASMCs中PTEN蛋白的表達(dá)水平;引入PTEN特異性抑制劑bpv(Hopic),利用Western blot選取最佳抑制濃度后干預(yù)培養(yǎng)HASMC,培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白,采用western blotting檢測各組人主動脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平,各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。最后,為明確PTEN是否參與了β-磷酸甘油促進(jìn)HASMC鈣化的過程,用10m mol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGEs、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGEs+200μmol/L bp V(Hopic)分別作用于三組人主動脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng),設(shè)一空白對照組,培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白,采用western blotting檢測各組人主動脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平,各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。用10mmol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+200μmol/L bp V(Hopic)分別作用于兩組人主動脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng),設(shè)一空白對照組,培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白,采用western blo tting檢測各組人主動脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平,各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。結(jié)果:(1)用不同濃度AGEs進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng)后的HASMC其鈣化程度及成骨相關(guān)蛋白OPG、Run x2、BMP2的表達(dá)水平均高于空白對照組,且隨著干預(yù)所用AGEs濃度的升高而增強(qiáng)。(2)用不同濃度AGEs進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng)的HASMC其PTEN蛋白的表達(dá)水平均高于空白對照組,且隨著干預(yù)所用AGEs濃度的升高而增強(qiáng),給予AGEs干預(yù)不同時間后的HASMC,于48h時PTEN蛋白的表達(dá)最強(qiáng)。(3)AGEs+bp V(Hopic)干預(yù)組細(xì)胞的鈣化程度及成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、B MP2的表達(dá)水平均低于單純AGEs干預(yù)組細(xì)胞,但高于空白對照組。(4)β-磷酸甘油組、β-磷酸甘油+AGEs組、β-磷酸甘油+AGEs+bp V(Hopic)組細(xì)胞的鈣化程度及成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平均高于空白對照組,其中β-磷酸甘油+AGEs組細(xì)胞的鈣化程度和成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)水平最高。(5)β-磷酸甘油組和β-磷酸甘油+bp V(Hopic)組細(xì)胞的鈣化程度及成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平均高于空白對照組,但兩者之間無明顯差別。結(jié)論:1.AGEs可促進(jìn)人主動脈平滑肌細(xì)胞的鈣化及成骨相關(guān)蛋白OPG、RUNX2、BMP2的表達(dá),AGEs可上調(diào)人主動脈平滑肌細(xì)胞中PTEN蛋白的表達(dá),在PTEN蛋白被抑制后,AGEs促進(jìn)人主動脈平滑肌細(xì)胞鈣化及成骨相關(guān)蛋白表達(dá)的作用降低;3.PTEN對β-磷酸甘油促進(jìn)人主動脈平滑肌細(xì)胞發(fā)生鈣化的作用無明顯影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543;R587.2

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本文編號：2349900