發(fā)布時間：2018-11-22 16:33

【摘要】：目的:探討PTEN與人主動脈血管平滑肌細胞(HASMC)鈣化的潛在關系,明確PTEN是否能夠介導AGEs促進HASMC的鈣化。方法:用不同濃度AGEs(25mg/L、50mg/L、100mg/L)分別作用于三組人主動脈平滑肌細胞進行干預培養(yǎng),設正常條件下(91%DMEM高糖培養(yǎng)基+6%胎牛血清+2%生長因子+1%雙抗)培養(yǎng)的HASMC為一空白對照組,培養(yǎng)2天后先取部分細胞提取蛋白,采用western blotting檢測各組人主動脈平滑肌細胞成骨相關蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達水平,各組剩余細胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。為明確PTEN是否參與了AGEs促進HASMC鈣化的過程,給予不同濃度(0mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)及不同時間長度(0h、12h、24h、48h)AGEs干預細胞后,Western blot檢測HASMCs中PTEN蛋白的表達水平;引入PTEN特異性抑制劑bpv(Hopic),利用Western blot選取最佳抑制濃度后干預培養(yǎng)HASMC,培養(yǎng)2天后先取部分細胞提取蛋白,采用western blotting檢測各組人主動脈平滑肌細胞成骨相關蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達水平,各組剩余細胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。最后,為明確PTEN是否參與了β-磷酸甘油促進HASMC鈣化的過程,用10m mol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGEs、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGEs+200μmol/L bp V(Hopic)分別作用于三組人主動脈平滑肌細胞進行干預培養(yǎng),設一空白對照組,培養(yǎng)2天后先取部分細胞提取蛋白,采用western blotting檢測各組人主動脈平滑肌細胞成骨相關蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達水平,各組剩余細胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。用10mmol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+200μmol/L bp V(Hopic)分別作用于兩組人主動脈平滑肌細胞進行干預培養(yǎng),設一空白對照組,培養(yǎng)2天后先取部分細胞提取蛋白,采用western blo tting檢測各組人主動脈平滑肌細胞成骨相關蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達水平,各組剩余細胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。結(jié)果:(1)用不同濃度AGEs進行干預培養(yǎng)后的HASMC其鈣化程度及成骨相關蛋白OPG、Run x2、BMP2的表達水平均高于空白對照組,且隨著干預所用AGEs濃度的升高而增強。(2)用不同濃度AGEs進行干預培養(yǎng)的HASMC其PTEN蛋白的表達水平均高于空白對照組,且隨著干預所用AGEs濃度的升高而增強,給予AGEs干預不同時間后的HASMC,于48h時PTEN蛋白的表達最強。(3)AGEs+bp V(Hopic)干預組細胞的鈣化程度及成骨相關蛋白OPG、Runx2、B MP2的表達水平均低于單純AGEs干預組細胞,但高于空白對照組。(4)β-磷酸甘油組、β-磷酸甘油+AGEs組、β-磷酸甘油+AGEs+bp V(Hopic)組細胞的鈣化程度及成骨相關蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達水平均高于空白對照組,其中β-磷酸甘油+AGEs組細胞的鈣化程度和成骨相關蛋白的表達水平最高。(5)β-磷酸甘油組和β-磷酸甘油+bp V(Hopic)組細胞的鈣化程度及成骨相關蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達水平均高于空白對照組,但兩者之間無明顯差別。結(jié)論:1.AGEs可促進人主動脈平滑肌細胞的鈣化及成骨相關蛋白OPG、RUNX2、BMP2的表達,AGEs可上調(diào)人主動脈平滑肌細胞中PTEN蛋白的表達,在PTEN蛋白被抑制后,AGEs促進人主動脈平滑肌細胞鈣化及成骨相關蛋白表達的作用降低;3.PTEN對β-磷酸甘油促進人主動脈平滑肌細胞發(fā)生鈣化的作用無明顯影響。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543;R587.2

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本文編號：2349900