【摘要】：HPS2(Hermansky-Pudlak syndrome type2)綜合癥為一種常染色體隱性遺傳病,主要癥狀包括眼部皮膚白化、肺部纖維化、出血傾向和免疫缺陷。目前的研究表明,該病的發(fā)生主要與溶酶體相關(guān)細(xì)胞器的生物合成或功能改變有關(guān),尚無有效的治療方法。HPS2型綜合癥的致病基因?yàn)锳p3b1基因,它編碼AP-3蛋白復(fù)合體(adaptor protein-3 complex)的β-3A亞基,該基因的突變導(dǎo)致AP-3功能缺失,進(jìn)而阻礙溶酶體-內(nèi)體轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的正常運(yùn)行,影響范圍較廣。Pearl小鼠的Ap3b1基因突變,是HPS2型綜合癥的動物模型。本實(shí)驗(yàn)室之前的研究發(fā)現(xiàn),pearl雌鼠的單窩產(chǎn)仔數(shù)與對照組相比明顯降低,子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列疏松。已知β-catenin可以通過E-cadherin參與細(xì)胞間連接,而β-catenin的去磷酸化及膜定位作用又依賴于PCP-2。有研究表明AP-3能夠識別并結(jié)合PCP-2,并參與PCP-2的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和定位。我們通過Western blot實(shí)驗(yàn)檢測β-catenin的膜定位情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)pearl小鼠子宮組織中的β-catenin的含量和膜定位并無異常。與此同時(shí),我們卻發(fā)現(xiàn)pearl小鼠子宮組織中免疫球蛋白G(IgG)的含量大幅度降低。經(jīng)檢測,pearl小鼠血清中IgG重鏈水平同樣偏低,但輕鏈水平并沒有隨之大幅降低,說明pearl小鼠可能存在某種免疫缺陷。鑒于IgG是唯一可以通過胎盤的免疫球蛋白,它的缺失可能會造成pearl小鼠的生殖力降低。雖然關(guān)于HPS2型病人的免疫缺陷癥狀也有報(bào)道,但目前沒有關(guān)于其體液免疫缺陷的詳細(xì)研究。為了確定pearl小鼠的體液免疫缺陷癥狀,我們通過ELISA檢測其血清中IgG、IgM和IgA的水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)IgG、IgM的含量明顯低于正常小鼠,且隨著年齡增長差異逐漸增大;而IgA的平均水平較高,個(gè)體差異較大。同時(shí)我們還對pearl小鼠脾臟組織中IgG、IgM和IgA的mRNA水平進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)IgG的mRNA水平同樣較低,且隨年齡的增長并無改善,但I(xiàn)gM和IgA的mRNA水平卻隨著年齡增長而大幅度上升甚至超過正常水平。這些結(jié)果說明pearl小鼠可能存在較為嚴(yán)重的體液免疫缺陷,甚至免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換也存在異常。由于免疫球蛋白主要由活化的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生,我們對不同年齡的小鼠脾臟中成熟B淋巴細(xì)胞的含量進(jìn)行了流式檢測,結(jié)果顯示隨著pearl小鼠發(fā)育逐漸成熟,其脾臟中成熟B淋巴細(xì)胞的含量可以達(dá)到正常水平,甚至趕超野生小鼠,說明pearl小鼠B細(xì)胞的發(fā)育過程基本正常;對脾臟進(jìn)行形態(tài)學(xué)和組織學(xué)觀察同樣未發(fā)現(xiàn)顯著差異,說明pearl小鼠的B淋巴細(xì)胞可能在活化階段或者免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換過程中存在異常。大多數(shù)B細(xì)胞的活化需要抗原和共刺激信號的共同作用,成熟B細(xì)胞表面的CD40可以與CD40L結(jié)合,為B細(xì)胞提供激活信號,我們檢測到pearl小鼠脾臟中CD40L的轉(zhuǎn)錄水平明顯偏低,這可能導(dǎo)致B細(xì)胞無法正�；罨�;活化誘導(dǎo)胞嘧啶脫氨酶(AID)可啟動免疫球蛋白的類別轉(zhuǎn)換,經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)pearl小鼠脾臟中AID的mRNA水平也明顯偏低,這說明pearl小鼠的免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換在啟動時(shí)可能存在異常。本課題在對pearl小鼠生殖力低下的研究過程中,發(fā)現(xiàn)其體液免疫同樣存在異常。通過探究pearl小鼠體液免疫缺陷的具體表型及原因,為HPS2型綜合癥的診斷和治療提供參考。對相關(guān)信號通路的深入研究也會加深我們對AP-3蛋白復(fù)合體功能的認(rèn)識。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R596

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本文編號：2319367