發(fā)布時(shí)間：2018-11-03 20:02

【摘要】：目的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種以慢性關(guān)節(jié)滑膜炎癥及血管翳形成為主要病理特征的系統(tǒng)性自身免疫病。RA的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚,有研究報(bào)道鈣網(wǎng)織蛋白(Calreticulin,CRT)可能參與了RA滑膜炎癥的形成。本課題在前期研究基礎(chǔ)上,采用ELISA及免疫熒光的方法檢測(cè)了CRT及黏附分子在RA患者血清、滑液以及滑膜中的表達(dá),并分析血清、滑液中CRT與黏附分子含量的相關(guān)性;然后利用臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)模型分析了CRT對(duì)黏附分子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用及其分子機(jī)制。通過(guò)研究CRT調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附作用進(jìn)而參與滑膜炎癥形成,從新的角度探討RA的病理機(jī)制,為RA的臨床診斷和治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1.本研究所選取的患者標(biāo)本均來(lái)自2013年2月至2014年2月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕免疫科和天津醫(yī)院關(guān)節(jié)外科中心,其中血清標(biāo)本包括RA患者60例,女47例,男13例,年齡55~79歲。關(guān)節(jié)滑膜和滑液標(biāo)本:RA:10例,其中女7例,男3例,年齡52~62歲;OA:14例,其中女10例,男4例,年齡56~69歲。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)RA血清和滑液中CRT及黏附分子的含量。2.采用免疫組織熒光方法分析CRT和黏附分子在RA及OA滑膜中的定位。3.分離培養(yǎng)原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,分析CRT對(duì)ICAM-1表達(dá)的影響。4.免疫印跡(Western blot)檢測(cè)CRT對(duì)Akt及eNOS活化的影響,并分析PI3K及e NOS抑制劑作用后ICAM-1的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS17.0軟件。計(jì)量資料以sx±表示,兩組間比較采用Student-Newman-Kenls檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)a=0.05。結(jié)果1.可溶性CRT在RA患者血清及滑液中表達(dá)量為(5.359±2.27)ng/ml,(4.997±0.826)ng/ml;可溶性ICAM-1以及VCAM-1在血清中的含量分別為(485.772±197.612)ng/ml,(419.609±188.338)ng/ml;在關(guān)節(jié)液中為(579.467±70.604)ng/ml和(511.368±101.39)ng/ml。分別分析RA患者血清和滑液中CRT與 s ICAM-1以及CRT與s VCAM-1含量的相關(guān)性。結(jié)果顯示,血清中CRT與s ICAM-1及與s VCAM-1均呈正相關(guān)(R2分別為0.612,0.554)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。關(guān)節(jié)液中CRT與s ICAM-1及與s VCAM-1也呈正相關(guān)(R2分別為0.710,0.405),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.免疫組織熒光結(jié)果顯示,與OA組相比,CRT及黏附分子ICAM-1,VCAM-1在RA滑膜組織的表達(dá)均增高;其中CRT在RA的滑膜襯里層和襯里下層,血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管周圍均有較強(qiáng)的表達(dá),而在OA的襯里層和血管周圍有較弱的表達(dá)。結(jié)果顯示,CRT在兩組患者滑膜組織中的表達(dá)量和定位均存在顯著的差異。ICAM-1與CRT共同表達(dá)在RA滑膜組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞上,VCAM-1則主要定位在RA滑膜襯里層細(xì)胞。3.CRT作用于內(nèi)皮細(xì)胞使黏附分子的表達(dá)上調(diào),且具有劑量依賴性。當(dāng)CRT濃度為5ng/ml時(shí),與空白對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(平均熒光強(qiáng)度MFI:(98.7±10.51)),當(dāng)濃度達(dá)到50n/ml及更高時(shí)ICAM-1的表達(dá)顯著升高。4.CRT能夠促使內(nèi)皮細(xì)胞Akt的磷酸化,激活PI3K/Akt通路。PI3K/Akt被抑制時(shí),CRT活化的e NOS減少。PI3K/Akt-e NOS通路被抑制劑后CRT誘導(dǎo)的ICAM-1的表達(dá)也明顯下調(diào)。結(jié)論1.CRT及可溶性黏附分子s ICAM-1、s VCAM-1在RA患者血清及滑液中的表達(dá)量均升高,且CRT與這兩種黏附分子在血清和關(guān)節(jié)液中的含量均呈正相關(guān)。2.CRT與ICAM-1共同表達(dá)在RA滑膜血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管周圍;與VCAM-1則共定位于RA滑膜襯里層細(xì)胞。3.CRT能夠上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1的表達(dá),且具有劑量依賴性。4.CRT可通過(guò)活化內(nèi)皮細(xì)胞中的Akt蛋白,從而調(diào)節(jié)ICAM-1的表達(dá)。另外eNOS作為PI3K/Akt的下游分子也參與了CRT對(duì)黏附分子的調(diào)節(jié)。本課題研究結(jié)果提示CRT可通過(guò)PI3K/Akt/e NOS這條信號(hào)通路調(diào)節(jié)黏附分子的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)RA滑膜炎癥反應(yīng),參與RA病理機(jī)制的形成。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R593.22;R446.6

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳雅;呂婷;胡晶晶;吳燕潔;仇雅t，

本文編號(hào)：2308864