【摘要】：背景：氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要的角色。氧化應(yīng)激是指在細(xì)胞和組織中過度產(chǎn)生的活性氧和氮自由基(ROS和RNS)或者內(nèi)源性抗氧化基因的活性下調(diào)而引起的不平衡。臨床研究顯示，外源性給予糖尿病患者單劑或者兩到三種抗氧劑均無明顯預(yù)防并發(fā)癥的效果。因此，上調(diào)內(nèi)源性、多種抗氧化劑來預(yù)防糖尿病心血管并發(fā)癥可能是一個(gè)更好的方法。我們發(fā)現(xiàn)，C66作為姜黃素的一種衍生物能夠有效的抑制高血糖引起的炎癥反應(yīng)和巨噬細(xì)胞浸潤，進(jìn)而顯著的預(yù)防糖尿病誘導(dǎo)的JNK活性增加而引起的大鼠的腎臟損傷。那么，是否C66作為一個(gè)有效的抗氧化劑能夠通過抑制JNK的活性和上調(diào)內(nèi)源性抗氧化劑的表達(dá)及功能，進(jìn)而預(yù)防糖尿病心血管并發(fā)癥尚未有報(bào)導(dǎo)。 目的：本研究旨在探討應(yīng)用C66處理糖尿病小鼠，是否具有預(yù)防和/或延緩糖尿病誘導(dǎo)的心血管的病理改變的發(fā)展進(jìn)程。 方法：雄性C57BL/6J小鼠應(yīng)用單次腹腔注射鏈脲霉素造成糖尿病小鼠模型。糖尿病和年齡性別一致的對照組小鼠均隨機(jī)分為3組，給予溶劑、C66或者JNKi（sp600125）處理。這三種處理方法均采用劑量為5mg/kg體重隔日灌胃達(dá)3個(gè)月。血壓和心功能分別在應(yīng)用鏈脲霉素誘導(dǎo)糖尿病前（0M）和小鼠處死時(shí)（3M）檢測；心肌炎癥反應(yīng)(CD68, MCP-1),纖維化(CTGF, TGF-β1),氧化應(yīng)激（3-NT,MDA）,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能紊亂(GRP78，IRE1，ATF4，CHOP, Caspase-12)和凋亡（BAX/BCL-2， Caspase-3， TUNEL）通過天狼星紅染色、免疫印跡、末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP切口末端標(biāo)記技術(shù)、硫代巴比土酸法等方法檢測。同時(shí)，我們主要應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)等方法進(jìn)行小鼠主動(dòng)脈被用于檢測炎癥反應(yīng)(PAI-1，TNF-α，和p-JNK)、氧化應(yīng)激(3-NT)、纖維化(天狼星紅染色和肥大細(xì)胞染色)、細(xì)胞凋亡(TUNEL)和增殖(PCNA)和Nrf2的表達(dá)和功能以及MT的表達(dá)。 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)C66和JNKi均能有效的防止1型糖尿病引起的小鼠心肌炎癥、纖維化、氧化損傷、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能紊亂和凋亡。C66上調(diào)NFE2-相關(guān)因子2（Nrf2）的表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄活性，增加Nrf2的磷酸化作用及其下游抗氧化因子的表達(dá)。并且，C66能夠恢復(fù)糖尿病小鼠的金屬硫蛋白(MT)將近對照組水平。C66和JNKi通過抑制JNK磷酸化作用，，可以顯著預(yù)防糖尿病誘導(dǎo)的小鼠主動(dòng)脈炎癥反應(yīng)、氧化和氮化損傷、細(xì)胞凋亡、增殖和纖維化的增加。此外，在正常和糖尿病的條件下，通過抑制JNK磷酸化作用，C66和JNKi顯著增加了主動(dòng)脈Nrf2的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄功能(增加Nrf2下游基因的表達(dá))，并且恢復(fù)了糖尿病小鼠MT的表達(dá)。 結(jié)論：在糖尿病小鼠中，應(yīng)用C66處理能夠顯著預(yù)防糖尿病誘導(dǎo)的心功能紊亂、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；心肌和主動(dòng)脈的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激損傷、纖維化和細(xì)胞凋亡。而C66對糖尿病的心血管的保護(hù)作用的機(jī)制可能是通過抑制JNK的活性，同時(shí)上調(diào)內(nèi)源性抗氧化基因(Nrf2和MT)的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄功能。
[Abstract]:Background: oxidative stress and inflammation play an important role in the occurrence and development of diabetic complications. Oxidative stress refers to the imbalance caused by excessive production of reactive oxygen species and nitrogen free radicals (ROS and RNS) or down-regulation of endogenous antioxidant genes in cells and tissues. Clinical studies showed that exogenous administration of single or two to three antioxidants did not significantly prevent complications in diabetic patients. Therefore, upregulating endogenous, multiple antioxidants to prevent diabetic cardiovascular complications may be a better way. We found that C66 as a derivative of curcumin can effectively inhibit hyperglycemia induced inflammation and macrophage infiltration and thus significantly prevent diabetic induced increase in JNK activity in rats kidney damage. Whether C66 as an effective antioxidant can prevent diabetic cardiovascular complications by inhibiting the activity of JNK and up-regulating the expression and function of endogenous antioxidants has not been reported. Objective: to investigate whether the treatment of C66 in diabetic mice can prevent and / or delay the progression of diabetic induced cardiovascular pathological changes. Methods: male C57BL/6J mice were induced by single intraperitoneal injection of streptozotocin. Diabetic and age-matched control mice were randomly divided into 3 groups, treated with solvent, C66 or JNKi (sp600125). All of the three treatments were treated with 5mg/kg for 3 months by gavage every other day. The blood pressure and heart function were measured before streptozotocin induced diabetes (0 M) and mice were killed (3 M). Myocardial inflammatory response (CD68, MCP-1), fibrosis (CTGF, TGF- 尾 1), oxidative stress (3-NTN MDA), endoplasmic reticulum dysfunction (GRP78,IRE1,ATF4,CHOP, Caspase-12) and apoptosis (BAX/BCL-2, Caspase-3,) TUNEL) was detected by Sirius red staining, Western blot, terminal deoxyribonucleic acid mediated dUTP Nick end labeling and thiobarbituric acid method. At the same time, we mainly used immunohistochemical staining and real-time polymerase chain reaction to detect inflammatory response (PAI-1,TNF- 偽, and p-JNK), oxidative stress (3-NT) in mouse aorta. Fibrosis (Sirius red staining and mast cell staining), the expression and function of apoptotic (TUNEL) and proliferative (PCNA) and Nrf2, and the expression of MT. Results: both C66 and JNKi could effectively prevent myocarditis, fibrosis, oxidative injury, endoplasmic reticulum dysfunction and apoptosis induced by type 1 diabetes in mice. C66 upregulated the expression of NFE2- related factor 2 (Nrf2) and its transcriptional activity. The phosphorylation of Nrf2 and the expression of antioxidants downstream were increased. In addition, C66 can restore the level of metallothionein (MT) in diabetic mice near the control level. C66 and JNKi can significantly prevent diabetic induced aortic inflammation, oxidation and nitridation injury by inhibiting the phosphorylation of JNK. Increased apoptosis, proliferation and fibrosis. In addition, under normal and diabetic conditions, by inhibiting JNK phosphorylation, C66 and JNKi significantly increased the expression and transcription of Nrf2 in aorta (increased the expression of downstream Nrf2 gene) and restored the expression of MT in diabetic mice. Conclusion: in diabetic mice, C66 treatment can significantly prevent diabetic induced cardiac dysfunction, endoplasmic reticulum stress, myocardial and aortic inflammation, oxidative stress injury, fibrosis and apoptosis. The protective mechanism of C66 on diabetic cardiovascular may be by inhibiting the activity of JNK and upregulating the expression and transcription of endogenous antioxidant genes (Nrf2 and MT).
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐仁生;夏建紅;王玉梅;龔世園;喻達(dá)輝;;大珠母貝金屬硫蛋白cDNA克隆與序列特征分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年07期

2 徐玉鳳;李一勤;劉進(jìn)元;;水稻新型MT基因的鑒定及其基因家族分子特征分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年26期

3 徐玉鳳;李一勤;劉進(jìn)元;;水稻3型金屬硫蛋白基因的分離和表達(dá)研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年27期

4 馬蘭軍;李峰;由文華;;鋅-金屬硫蛋白對力竭運(yùn)動(dòng)大鼠肝臟和股四頭肌線粒體ATPase損傷的保護(hù)作用[J];安徽師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年06期

5 田子強(qiáng);王小玲;吳偉;李保慶;王永軍;;金屬硫蛋白3在食管癌組織中的表達(dá)及其與金屬硫蛋白1和2表達(dá)的關(guān)系[J];癌癥;2008年02期

6 趙革平,沃興德;姜黃素及其衍生物的抗氧化作用研究概況[J];浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年06期

7 劉金平;趙春芳;李平亞;李銑;;偽人參皂苷GQ對異丙腎上腺素致大鼠急性心肌缺血的改善作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

8 卜麗梅;吳綏生;賀宏英;;奧扎格雷鈉對大鼠心肌缺血的抗氧化作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年04期

9 高霖,王冬艷,李揚(yáng),石彥榮,卜定方,龐永正,唐朝樞;大鼠心肌成纖維細(xì)胞合成金屬硫蛋白[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

10 邱永祥,阮明,賈鳳蘭,邱飛嬋,李雪婷,尚蘭琴,張寶旭;金屬硫蛋白對秋水仙堿致肝毒性的保護(hù)作用[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 林育純;林忠寧;梁嘉斌;方飛;魏青;楊杏芬;;靶向金屬硫蛋白基因核酶對人鼻咽癌細(xì)胞毒性轉(zhuǎn)歸的影響[A];第五屆廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會暨第三屆廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

2 張彬;肖定福;李麗立;陳宇光;王瑩;吳宗明;張復(fù)生;蘭欣怡;;金屬硫蛋白在奶牛體內(nèi)的代謝規(guī)律研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜生態(tài)學(xué)分會第七屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

3 DUAN Jialin;CUI Jia;GUAN Yue;YIN Ying;WEI Guo;WENG Yan;ZHU Yanrong;GUO Chao;WANG Yanhua;YAN Jiajia;WU Xiaoxiao;XI Miaomiao;WEN Aidong;;Total saponins of Aralia taibaiensis protects myocardial cells against oxidative stress through the Nrf2-dependent antioxidant pathway[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

4 陳敏;郭韌;;姜黃素對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

5 黃小平;鄧常清;邱詠園;王蓓;唐映紅;曾嶸;;黃芪和三七主要有效成分配伍對小鼠腦缺血再灌注后腦組織氧化應(yīng)激損傷及Nrf2/HO-1信號通路的影響[A];第九次全國中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論研究學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2013年

6 Li Tingting;Tian Hongbo;Zhao Yuxia;An Fengshuang;Zhang Lei;Zhang Jianning;Peng Jie;Zhang Yun;Guo Yuan;;Heme oxygenase-1 inhibits progression and destabilization of vulnerable plaques in a rabbit model of atherosclerosis[A];山東省醫(yī)學(xué)會第十一次老年醫(yī)學(xué)分會學(xué)術(shù)會論文匯編[C];2012年

7 許雅思;凌雨田;林能明;蘇丹;;表觀遺傳調(diào)控在藥食植物提取物抗腫瘤機(jī)制中的研究進(jìn)展[A];抗腫瘤藥物研究新進(jìn)展與腫瘤個(gè)性化藥物治療論壇論文集[C];2013年

8 ;Effect of piperine on the pharmacokinetics of curcumin[A];2012年中國藥學(xué)大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

9 Hao-Peng Sun;Zheng-Yu Jiang;Meng-Chen Lu;Qi-Dong You;;Discovery of potent Keap 1-Nrf2 Protein-Protein Interaction Inhibitor Based on Molecular Binding Determinants Analysis and structure-guided modification[A];第十二屆全國青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會論文集[C];2014年

10 向忠軍;李杰;陳伶利;簡維雄;張?jiān)戮?彭嶺;郭宗耀;;中藥干預(yù)對冠心病血液分子生物學(xué)指標(biāo)的調(diào)控及與表觀遺傳學(xué)的相關(guān)性研究[A];第九次全國中西醫(yī)結(jié)合診斷學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 趙宇光;基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1β對高脂誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的預(yù)防作用及機(jī)制[D];吉林大學(xué);2011年

2 劉林;與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的氧化還原活性金屬絡(luò)合物的研究[D];中南大學(xué);2011年

3 莊秀園;沙棘籽渣黃酮對糖基化終產(chǎn)物抑制作用研究[D];華東師范大學(xué);2011年

4 孫路虹;人肝癌低表達(dá)基因MT1M的克隆和功能研究[D];南京師范大學(xué);2003年

5 李文宏;復(fù)脈湯有效部位的提取及抗應(yīng)激性心律失常的作用與作用機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

6 蔡國君;動(dòng)脈壓力感受性反射功能與動(dòng)脈粥樣硬化[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 苗雅;糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制、早期診斷和治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2005年

8 牟忠卿;糖尿病大鼠不同組織中氧化應(yīng)激的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2005年

9 劉蔚;線粒體ATP敏感性鉀通道及其開放劑抗心肌缺血作用的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2001年

10 季明杰;中藥姜黃組分芳姜黃酮誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的研究[D];山東大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李秀珍;解耦聯(lián)蛋白2對糖尿病小鼠心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 李衛(wèi)紅;葉酸對2型糖尿病大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮功能及心肌細(xì)胞凋亡的影響[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2005年

3 胡楠;香煙引起的心力衰竭機(jī)制及金屬硫蛋白對小鼠心肌的保護(hù)研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 李偉;三聚氰胺對單細(xì)胞生物四膜蟲影響的研究[D];山東師范大學(xué);2011年

5 趙新燦;姜黃素對氧化損傷的小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞的保護(hù)作用研究[D];江南大學(xué);2011年

6 何明蕊;鋅制劑對糖尿病大鼠腎組織氧化損傷保護(hù)作用的研究[D];吉林大學(xué);2011年

7 任明;金屬硫蛋白對百草枯致小鼠急性肺損傷的保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2011年

8 李興豐;基于目標(biāo)成分“敲出/敲入”的姜黃藥效物質(zhì)辨識與質(zhì)量控制方法的初步研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2011年

9 劉建坤;吡咯烷二硫代氨基甲酸酯對2型糖尿病大鼠心肌的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

10 秦江媛;短期胰島素強(qiáng)化治療與新診斷2型糖尿病患者JNK信號通路及HO-1關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

本文編號：2302641