【摘要】：目的為探討PRDM16、CIDE-B在成人脂肪組織中的表達水平及與肥胖的關系,本研究通過檢測PRDM16、CIDE-B蛋白分別在正常體重者和超重肥胖者的皮下脂肪和腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織中的表達水平,發(fā)現(xiàn)PRDM16、CIDE-B蛋白相對表達水平與超重肥胖的關系;同時檢驗PRDM16、CIDE-B基因啟動子甲基化水平與二者蛋白相對表達量的關系,探討PRDM16、CIDE-B基因甲基化與蛋白表達的關系。方法選取醫(yī)院的腹部手術患者126例,男性25例,女性101例,排除孕婦、殘障或精神障礙者、繼發(fā)性肥胖者、惡性腫瘤患者及乙肝、艾滋病、結核等傳染性疾病患者。收集各研究對象的身高、體重、年齡、血糖值等生理生化指標。采用我國肥胖診斷標準,將研究對象分為正常體重組(18.5kg/m2BMI24kg/m2)和超重肥胖組(BMI≥24kg/m2)。首先分別提取皮下脂肪和大網(wǎng)膜脂肪組織的總蛋白,然后采用蛋白質(zhì)免疫印跡技術,其中PRDM16目的蛋白電泳采用8%分離膠,5%濃縮膠,CIDE-B蛋白電泳采用12%分離膠,5%分離膠,電泳過后轉(zhuǎn)膜2小時,恒壓設為80V,最后進行一抗二抗免疫反應,將配置混合好的ECL超敏發(fā)光液在凝膠成像系統(tǒng)中與免疫反應后的PVDF膜接觸進行發(fā)光反應,將所得條帶圖進行拍照保存。采用Gel pro Analyzer軟件分析目的條帶的灰度值,每一個樣本的目的蛋白相對表達量以目的條帶的灰度值和相應樣本GAPDH的條帶灰度值的比值表示。采用IBM SPSS Statistics 21.0軟件進行統(tǒng)計學分析,兩組差異比較采用兩獨立樣本t檢驗或Mann-Whitney U檢驗,三組差異比較采用方方差分析或Kruskal-Wallis檢驗,計數(shù)資料采用χ2檢驗;各生理生化因素對蛋白相對表達量的影響程度分析采用多重線性回歸;皮下和大網(wǎng)膜脂肪組織目的蛋白的表達量差異采用配對t檢驗或Wilcoxon符號秩和檢驗;檢驗水準α=0.05。結果1.配對樣本t檢驗結果顯示,PRDM16蛋白在皮下脂肪組織中的相對表達量高于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織,差異沒有統(tǒng)計學意義(t=1.001,P=0.319);CIDE-B蛋白在皮下脂肪組織中的相對表達量高于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織,差異有統(tǒng)計學意義(t=2.340,P=0.021)。2.皮下脂肪組織的PRDM16蛋白的相對表達量在正常組和超重肥胖組的差異有統(tǒng)計學意義(t=2.587,P=0.011),且正常組的相對表達量高于超重肥胖組。大網(wǎng)膜脂肪組織的PRDM16基因的相對表達量在正常體重組和超重肥胖組之間的差異沒有統(tǒng)計學意義(t=1.671,P=0.097)。3.皮下脂肪組織的CIDE-B基因的相對表達量在正常體重組和超重肥胖組的差異沒有統(tǒng)計學意義(t=1.558,P=0.122)。大網(wǎng)膜脂肪組織的CIDE-B基因的相對表達量在正常體重組和超重肥胖組間的差異有統(tǒng)計學意義(t=2.253,P=0.026),且超重肥胖組的CIDE-B的相對表達量高于正常體重組。4.皮下脂肪組織中,收縮壓140mm Hg的CIDE-B基因的蛋白相對表達量小于收縮壓≥140mm Hg的CIDE-B的蛋白相對表達量,且差異有統(tǒng)計學意義(t=2.319,P=0.025);大網(wǎng)膜脂肪組織中,舒張壓90mm Hg的CIDE-B基因的蛋白相對表達量小于舒張壓≥90mm Hg的CIDE-B的蛋白相對表達量,且差異有統(tǒng)計學意義(t=2.290,P=0.024)。三組總膽固醇水平的CIDE-B蛋白相對表達量的差異有統(tǒng)計學意義(F=7.160,P=0.028),進一步多重比較結果顯示,3.0TC5.2mmol/L的CIDE-B蛋白表達低于TC≥5.2mmol/L的蛋白表達,且差異有統(tǒng)計學意義(P=0.026)。5.各生理生化指標與蛋白相對表達量的多重線性回歸分析結果顯示,BMI與皮下PRDM16蛋白相對表達量有關(β=-0.282,P=0.004),BMI水平低者的PRDM16蛋白表達量高于BMI水平高者。BMI與皮下CIDE-B蛋白相對表達量有關(β=0.213,P=0.025),BMI水平高者的CIDE-B蛋白表達量高于BMI水平低者。6.皮下脂肪組織PRDM16蛋白相對表達量與大網(wǎng)膜PRDM16蛋白相對表達量呈顯著的正相關(r=0.482,P0.001),皮下脂肪組織CIDE-B蛋白相對表達量與大網(wǎng)膜CIDE-B相對表達量呈顯著正相關(r=0.363,P0.001)。而PRDM16與CIDE-B的蛋白相對表達量不存在線性相關(P0.05)。7.皮下脂肪組織中,PRDM16基因的CPG_28位點的甲基化水平與蛋白相對表達量的關系存在統(tǒng)計學意義(β=-3.762,P=0.032),腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織中,PRDM16基因的CPG_28(β=-4.726,P=0.002)位點的甲基化水平與蛋白相對表達量的關系存在統(tǒng)計學意義。甲基化水平高的蛋白表達水平較低。結論PRDM16、CIDE-B蛋白表達與成人肥胖存在一定的相關性,皮下脂肪組織中,正常體重者的PRDM16蛋白相對表達量高于超重肥胖者;大網(wǎng)膜脂肪組織中,正常體重者的CIDE-B蛋白相對表達量低于超重肥胖者;CIDE-B蛋白相對表達量與收縮壓、舒張壓、TC水平可能存在聯(lián)系;此外,PRDM16基因啟動子CPG_28位點的甲基化水平越高,蛋白表達水平越低。
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【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R589.2

【參考文獻】

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本文編號：2298125