【摘要】：目的:探討基因(ABCG2、SLC2A9和P2RX7)CpG島處甲基化與原發(fā)性痛風(fēng)的相關(guān)性;并應(yīng)用iTRAQ標(biāo)記技術(shù)結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),篩選出原發(fā)性痛風(fēng)血清差異蛋白,進(jìn)一步分析差異蛋白(TBB4A)的編碼基因(TUBB4A)的甲基化情況,為原發(fā)性痛風(fēng)的早期診斷和早期治療提供了堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)。方法:1、提取原發(fā)性痛風(fēng)組及健康對(duì)照組的全血DNA,應(yīng)用焦磷酸測序方法進(jìn)行基因甲基化檢測。用t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行甲基化水平的分析。2、應(yīng)用iTRAQ標(biāo)記技術(shù)結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩選出差異蛋白,并且通過生物學(xué)過程、細(xì)胞定位、分子功能、KEGG通路及蛋白互作上進(jìn)行分析生物信息學(xué)分析找出有意義的差異蛋白。3、用Elisa技術(shù)進(jìn)行差異蛋白的血清學(xué)檢測,BCA法進(jìn)行總蛋白的血清學(xué)檢測,用t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行差異蛋白含量的分析。結(jié)果:1、ABCG2 CpG(pos1、2、4、5、6),SLC2A9 CpG(pos1、3、4、5、7)及P2RX7CpG pos2甲基化水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。2、共鑒定出95個(gè)差異蛋白(其中50個(gè)上調(diào)蛋白和45個(gè)下調(diào)蛋白)和20條顯著的KEGG通路。其中,甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、α-烯醇酶(ENOA)、磷酸甘油酸激酶(PGK1)、葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(G6PI)和膜突蛋白(MOES)等差異蛋白在原發(fā)性痛風(fēng)發(fā)病中可能起到重要的作用。3、蛋白TBB4A在原發(fā)性痛風(fēng)的血清中明顯高于健康對(duì)照組(P=0.023)。4、TUBB4A CpG pos4甲基化水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.036)。結(jié)論:1、基因ABCG2、SLC2A9和P2RX7的甲基化水平與原發(fā)性痛風(fēng)的發(fā)病相關(guān),但基因ABCG2的作用機(jī)制并未明確。2、蛋白TBB4A在血清中的表達(dá)與原發(fā)性痛風(fēng)的發(fā)病相關(guān)。3、基因TUBB4A的甲基化水平與原發(fā)性痛風(fēng)的發(fā)病相關(guān),但其作用機(jī)制仍不明。
[Abstract]:Objective: to investigate the correlation between methylation at CpG island of gene (ABCG2,SLC2A9 and P2RX7) and primary gout, and to screen serum differential proteins of primary gout by iTRAQ labeling and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS). Further analysis of methylation of differential protein (TBB4A) encoding gene (TUBB4A) provides a solid theoretical basis for early diagnosis and early treatment of primary gout. Methods: 1. Gene methylation was detected by pyrosequencing method in whole blood DNA, extracted from primary gout group and healthy control group. T test or nonparametric test was used to analyze methylation level. 2. Differential proteins were screened by iTRAQ labeling and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS). Molecular function, KEGG pathway and protein interaction were analyzed by bioinformatics to find the significant differential protein. 3. The differential protein was serologically detected by Elisa, and the total protein was detected by BCA. T-test or non-parametric test was used to analyze the differential protein content. Results: 1 the levels of ABCG2 CpG (pos1,2,4,5,6), SLC2A9 CpG (pos1,3,4,5,7) and P2RX7CpG pos2 methylation were significantly different (P0.05). A total of 95 differentially expressed proteins (50 up-regulated proteins and 45 down-regulated proteins) and 20 KEGG pathways were identified. Of which, Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), 偽 -enolase (ENOA), phosphoglycerate kinase (PGK1), glucose-6-phosphate isomerase (G6PI) and membranous protein (MOES) may play an important role in the pathogenesis of primary gout. The serum methylation level of TUBB4A in wind group was significantly higher than that in healthy control group (P0. 023), and the level of CpG pos4 methylation in TUBB4A was significantly higher than that in healthy control group (P0. 036). Conclusion: 1 the methylation level of gene ABCG2,SLC2A9 and P2RX7 is associated with the pathogenesis of primary gout. However, the mechanism of gene ABCG2 is not clear, the expression of protein TBB4A in serum is related to the pathogenesis of primary gout, the methylation level of gene TUBB4A is related to the pathogenesis of primary gout, but the mechanism is still unclear.
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R589.7

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本文編號(hào)：2266630