【摘要】：目的·從多囊卵巢綜合征患者卵泡液中分離提取外泌體并進行鑒定,明確卵泡液中外泌體的存在;從外泌體中分離提取miRNAs并檢測其表達量。方法·利用膜親和法提取卵泡液中外泌體,透射電鏡觀察大小和形態(tài);利用流式細胞儀檢測外泌體蛋白標志物CD63和CD81的表達;提取純化外泌體miRNAs,利用Taq Man探針real-time PCR檢測miR-125b、miR-19b和miR-222的表達。結果·透射電鏡下觀察到卵泡液外泌體呈圓形或橢圓形,直徑30~100 nm,有完整的膜結構,內含低密度物質;流式細胞儀檢測外泌體CD63和CD81呈陽性表達。Real-time PCR檢測到外泌體中miR-125b、miR-19b和miR-222的表達。結論·多囊卵巢綜合征患者卵泡液中可以收集到外泌體,可以通過電子顯微鏡和流式細胞儀對卵泡液中的外泌體進行鑒定。卵泡液外泌體中含有miR-125b、miR-19b和miR-222。
[Abstract]:Objective to isolate and identify the exocrine bodies from the follicular fluid of patients with polycystic ovary syndrome (PCOS), to identify the presence of the exocrine bodies in the follicular fluid, and to isolate and detect the expression of miRNAs from the exocrine bodies of the patients with polycystic ovary syndrome (PCOS). Methods Follicular fluid was extracted by membrane affinity method. The size and morphology of follicular fluid were observed by transmission electron microscope (TEM), and the expression of CD63 and CD81 were detected by flow cytometry. The exocrine miRNAswere extracted and purified, and the expression of miR-125b miR-19b and miR-222 was detected by Taq Man probe real-time PCR. Results under the transmission electron microscope, the exocrine body of follicular fluid was round or oval, with a diameter of 30 ~ 100 nm, a complete membrane structure and a low density substance. The positive expression of CD63 and CD81 in exocrine was detected by flow cytometry. Real-time PCR was used to detect the expression of miR-125bnmiR-19b and miR-222 in exocrine. Conclusion the exocrine bodies can be collected in the follicular fluid of patients with polycystic ovary syndrome, and the exocrine bodies in the follicular fluid can be identified by electron microscope and flow cytometry. The follicular exocrine contains miR-125b miR-19b and miR-222.
【作者單位】： 上海交通大學醫(yī)學院附屬國際和平婦幼保健院胚胎源性疾病研究所;浙江大學醫(yī)學院附屬婦產科醫(yī)院生殖遺傳教育部重點實驗室;
【基金】：國家科技支撐計劃(2012BAI32B00) 國家自然科學基金(81450038)~~
【分類號】：R711.75

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本文編號：2192716