【摘要】：目的:觀察1型糖尿病(T1DM)模型小鼠體內(nèi)T細(xì)胞亞群的變化及HMGB1蛋白的表達(dá),正丁酸鈉作為晚期炎癥因子HMGB1的拮抗劑,通過對HMGB1的抑制作用,探討其延緩1型糖尿病發(fā)展的可能機(jī)制與對輔助性T淋巴(Th)細(xì)胞的影響,闡明HMGB1及Th細(xì)胞在1型糖尿病發(fā)生和發(fā)展中的作用,為探索干預(yù)1型糖尿病的免疫策略提供新思路。方法:SPF級5-6周齡雄性C57BL/6品系小鼠30只,用常規(guī)飼料喂養(yǎng)1周,使小鼠適應(yīng)新的環(huán)境,一周后采用隨機(jī)分組方法將30只小鼠分為正常對照(NC)組,糖尿病(DM)組,正丁酸鈉(SB)組,每組小鼠各10只。稱取體重,按照40mg/kg的體重劑量,DM組、SB組腹腔注射由檸檬酸鹽緩沖液溶解的STZ(配置及注射過程于冰上操作),1次/天,連續(xù)5天;同時SB組給予生理鹽水溶解的正丁酸鈉500mg/kg,1次/天,持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束;DM組及NC組則同時腹腔注射相同量的0.9%的生理鹽水。小鼠造模前,測取一次基礎(chǔ)血糖;造模后,給予實(shí)驗(yàn)小鼠充足的食物和水,于第7天開始監(jiān)測隨機(jī)血糖,第7次血糖監(jiān)測后處死取材。觀察小鼠成模前后及正丁酸鈉干預(yù)后血糖水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟Th1、Th2、Th17及胰腺引流淋巴結(jié)(PLNs)中Th17細(xì)胞的分化比例,Western Blotting方法檢測HMGB1蛋白在小鼠胰腺組織中的表達(dá)水平,Elisa方法檢測小鼠血清中IL-1β細(xì)胞因子水平。結(jié)果:DM組小鼠在第2周末時血糖水平顯著高于NC組(P0.01),且多飲、多食、多尿,顯示DM組小鼠已存在糖尿病癥狀;與NC組相比,DM組小鼠脾臟Th1細(xì)胞比例顯著升高(P0.05),Th2細(xì)胞比例降低(P0.05),Th1/Th2比值明顯升高(P0.01),Th17細(xì)胞比例輕度下降,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);PLNs中Th17細(xì)胞比例明顯升高(P0.01);DM組小鼠外周血清IL-1β細(xì)胞因子水平顯著高于NC組(P0.01);胰腺組織HMGB1蛋白表達(dá)水平顯著高于NC組(P0.01)。與DM組相比,SB治療組小鼠發(fā)病時間延緩,發(fā)病率顯著降低(P0.05),血糖水平顯著降低(P0.05),脾臟組織中Th1細(xì)胞顯著減少(P0.05),Th2細(xì)胞輕度增加,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Th1/Th2比值顯著降低(P0.01),Th17細(xì)胞比例降低,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),PLNs中Th17細(xì)胞明顯減少(P0.01);胰腺組織中HMGB1蛋白水平顯著低于DM組(P0.01),外周血清IL-1β細(xì)胞因子水平相比DM組降低(P0.01)。結(jié)論:(1)在T1DM動物模型中,應(yīng)用正丁酸鈉干預(yù)可以延緩T1DM發(fā)病并減少T1DM發(fā)病率。(2)T1DM小鼠脾臟內(nèi)Th1細(xì)胞比例上調(diào),Th2細(xì)胞比例下降,PLNs中Th17細(xì)胞上調(diào),血清中IL-1β促炎細(xì)胞因子增多,以及胰腺組織中晚期炎癥介質(zhì)HMGB1蛋白表達(dá)增多,均有可能導(dǎo)致β細(xì)胞的持續(xù)破壞,進(jìn)而促進(jìn)T1DM的發(fā)生和發(fā)展。(3)正丁酸鈉可能通過調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)Th1、Th2及Th17細(xì)胞比例和血清中IL-1β促炎細(xì)胞因子水平來改善小鼠發(fā)病情況和血糖水平;在胰腺組織中正丁酸鈉可能通過抑制HMGB1晚期炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,減輕胰腺局部的炎癥反應(yīng),保護(hù)胰島β細(xì)胞免受破壞,從而延緩T1DM的發(fā)病進(jìn)程。
[Abstract]:Aim: to observe the changes of T cell subsets and the expression of HMGB1 protein in type 1 diabetes mellitus (T1DM) mice. Sodium butyrate was used as an antagonist of late inflammatory factor HMGB1. To explore the possible mechanism of delaying the development of type 1 diabetes and its effect on helper T lymphoid (Th) cells, to elucidate the role of HMGB1 and Th cells in the development and development of type 1 diabetes, and to provide a new way of thinking on the immunological intervention of type 1 diabetes. Methods Thirty C57BL / 6 male C57BL / 6 strain mice with SPF grade 5-6 weeks of age were fed with conventional diet for one week to adapt to the new environment. After one week, 30 mice were randomly divided into normal control (NC) group, diabetes mellitus (DM) group and sodium butyrate (SB) group. There were 10 mice in each group. According to the body weight dose of 40mg/kg, group SB was injected intraperitoneally with sodium butyrate 500 mg / kg / day, which was dissolved in citrate buffer solution once a day for 5 days, while the group SB was given sodium butyrate 500 mg / kg / day, and the control group was given sodium butyrate 500 mg / kg / day. At the end of the experiment, the DM group and NC group were intraperitoneally injected with 0.9% saline at the same time. The mice were given sufficient food and water to monitor random blood glucose on the 7th day, and then killed after the seventh blood glucose monitoring. The blood glucose levels were observed before and after the establishment of the model and the intervention of sodium butyrate in mice. The differentiation ratio of Th17 cells in spleen Th2T and pancreatic drainage lymph nodes (PLNs) was detected by flow cytometry. Western blotting was used to detect the expression of HMGB1 protein in mouse pancreas. Elisa was used to detect IL-1 尾 cytokines in serum of mice. Results at the end of the second week, the blood glucose level of the mice in the weight DM group was significantly higher than that in the NC group (P0.01). Compared with NC group, the proportion of Th1 cells in spleen of DM group increased significantly (P0.05) the proportion of Th2 cells decreased (P0.05) the ratio of Th1 / Th2 increased significantly (P0.01) the proportion of Th17 cells decreased slightly. There was no significant difference (P0.05) in the proportion of Th17 cells in PLNs (P0.01). The level of IL-1 尾 cytokines in peripheral blood of DM group was significantly higher than that of NC group (P0.01), and the expression level of HMGB1 protein in pancreatic tissue was significantly higher than that in NC group (P0.01). Compared with DM group, the onset time was delayed, the incidence rate was significantly decreased (P0.05), blood glucose level was significantly decreased (P0.05), Th1 cells in spleen tissue were significantly decreased (P0.05) and Th2 cells in spleen tissue were slightly increased. But the ratio of Th1 / Th2 decreased significantly (P0.01), the ratio of Th17 cells in PLNs decreased significantly (P0.01), the level of HMGB1 protein in pancreatic tissue was significantly lower than that in DM group (P0.01), and the level of IL-1 尾 cytokines in peripheral blood was lower than that in DM group (P0.01). Conclusion: (1) in the animal model of T1DM, sodium butyrate can delay the onset of T1DM and reduce the incidence of T1DM. (2) the proportion of Th1 cells in spleen of T1DM mice is up-regulated and Th17 cells in PLNs are up-regulated, and IL-1 尾 pro-inflammatory cytokines are increased in serum of T1DM mice. The increase of HMGB1 protein expression in pancreatic tissue may lead to the sustained destruction of 尾 cells. (3) Sodium butyrate may improve the incidence and blood sugar level of mice by regulating the proportion of Th1 Th2 and Th17 cells and the level of IL-1 尾 inflammatory cytokines in serum. Sodium butyrate may slow down the pathogenesis of T1DM by inhibiting the production of late HMGB1 inflammatory mediators, reducing the local inflammatory response of pancreas and protecting islet 尾 cells from destruction.
【學(xué)位授予單位】：長江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.1

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本文編號：2132519