【摘要】：研究背景代謝綜合征已成為人類所面臨的主要亞健康問(wèn)題之一,主要表現(xiàn)為肥胖、血壓升高、甘油三酯升高、心血管疾病、空腹血糖升高、慢性炎癥等多種代謝紊亂。近年來(lái)的研究表明代謝綜合癥對(duì)腎臟的功能有一定的損害作用,而腎臟在受損之后又反過(guò)來(lái)加重了代謝綜合癥的發(fā)展。研究表明:肥胖是代謝綜合征的主要誘因,肥胖不僅能誘發(fā)糖尿病、高血壓及胰島素抵抗(Insulin resistance,IR),肥胖能夠?qū)е履I臟損傷。由肥胖引起的腎損傷在醫(yī)學(xué)上統(tǒng)稱為肥胖相關(guān)性腎病(Obesity-related glomerulopathy,ORG),有報(bào)道稱ORG的臨床表現(xiàn)為血壓升高、血脂升高和微量白蛋白尿出現(xiàn),病理改變主要為腎小球的體積增大或者腎小球局部出現(xiàn)結(jié)節(jié)性硬化,是腎臟病的早期發(fā)展特征[1,2]。慢性腎臟病(Chronic kidney diesease,CKD)的防治已成為全球所面臨的重大公共健康問(wèn)題。2012年,Luxia Zhang等人的調(diào)查報(bào)告指出:在中國(guó),CKD病人的人數(shù)在逐年增加,CKD也已經(jīng)成為了危害公眾健康的重大問(wèn)題,特別在一些人口密集的農(nóng)村地區(qū),人數(shù)還在逐年遞增[3]。CKD病人的不斷增加,給全球經(jīng)濟(jì)帶來(lái)了巨大負(fù)擔(dān),因此,尋求可靠的治療方法來(lái)改變它的一些危險(xiǎn)因素,如血脂異常,已成為研究CKD的一個(gè)主要方面。硫化氫一直被認(rèn)為是一種有惡臭的毒性氣體,直到1990年,有人證明硫化氫(H2S)可以作為調(diào)節(jié)神經(jīng)功能的一種神經(jīng)遞質(zhì),能夠由細(xì)胞中的硫化氫合成酶,利用半胱氨酸為原料進(jìn)行合成,硫化氫作為內(nèi)源性的氣體信號(hào)分子才廣泛被人們接受(或認(rèn)知)[4]。隨著對(duì)硫化氫生理功能研究不斷深入,硫化氫對(duì)代謝性疾病的預(yù)防和治療作用的研究也廣泛展開(kāi),例如硫化氫對(duì)高血壓的作用,對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的改善已經(jīng)取得了可喜的結(jié)果。硫化氫對(duì)腎臟損傷的研究也已開(kāi)展了大量的研究,例如在急性腎損傷中,硫化氫對(duì)腎臟損傷的保護(hù)作用研究。然而,硫化氫對(duì)肥胖引起的慢性腎功能損傷是否具有保護(hù)作用還不清楚[5-7]。為此,我們首先用高脂飼料喂養(yǎng)小鼠誘導(dǎo)肥胖,建立腎損傷模型,然后再給予硫化氫,檢測(cè)腎功能;腎損傷的發(fā)生常伴著炎癥反應(yīng),為此,我們檢測(cè)炎癥因子和NF-κB信號(hào)途徑,研究炎癥因子在慢性腎損傷中的作用。目的1、建立肥胖引起的小鼠慢性腎臟損傷模型;2、確定硫化氫對(duì)肥胖誘導(dǎo)的小鼠慢性腎損傷具有抗炎作用;3、分析硫化氫對(duì)肥胖誘導(dǎo)小鼠慢性腎損傷的保護(hù)作用機(jī)制。方法1、建立肥胖引起的小鼠腎臟慢性損傷模型所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都是根據(jù)河南大學(xué)動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì)和倫理委員會(huì)的道德準(zhǔn)則進(jìn)行的。8周齡C57BL/6雄性實(shí)驗(yàn)小鼠是從南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所購(gòu)買,在河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的動(dòng)物飼養(yǎng)中心,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,進(jìn)行分組(低脂飼養(yǎng)組和高脂飼養(yǎng)組)造模和硫氫化鈉(Sodium Hydrosulfide,Na HS,H2S的供體)治療。2、小鼠生活習(xí)性的觀察及體重測(cè)量小鼠經(jīng)腹腔內(nèi)注射治療后,每隔2日檢查一次小鼠的狀況,如覓食、運(yùn)動(dòng)程度、精神狀態(tài)、皮毛光澤度等情況,并每周監(jiān)測(cè)小鼠體重和進(jìn)食、進(jìn)水量的變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行OGTT檢測(cè),然后處死小鼠,收集血液和組織材料,分別冷凍或固定保存。3、血液生化指標(biāo)檢測(cè)小鼠血漿用Cobas8000羅氏全自動(dòng)生化免疫血清工作站檢測(cè)分析,主要檢測(cè)血漿血液中的半胱氨酸酶抑制劑(又叫胱抑素C,Cys C),尿素(Urea),肌酐(Creatinine),甘油三酯(TG),總膽固醇(TC),高密度脂蛋白(HDL-C),低密度脂蛋白(LDL-C)。然后利用ELISA方法檢測(cè)KIM-1指標(biāo)。4、血漿和腎組織勻漿液中的細(xì)胞因子及TG的檢測(cè)利用ELISA方法檢測(cè)血清TNF-α和KIM-1指標(biāo),檢測(cè)腎組織勻漿液中的TNF-α、KIM-1、IL-6、MCP-1、IL-10的含量。檢測(cè)組織中的甘油三脂(TG)和總蛋白(TP),計(jì)算出腎臟中TG/TP的含量及變化。5、組織學(xué)形態(tài)觀察小鼠經(jīng)用1-3%戊巴比妥鈉鹽針劑麻醉后,先進(jìn)行心臟取血,收集血液,接著取出活體組織。腎臟組織進(jìn)行石蠟切片,切片經(jīng)蘇木精—伊紅染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色和PAS(Periodic Acid-Schiff)染色,以及使用Masson染色,觀察腎臟組織損傷,腎小管損傷以及腎小球基底膜變化情況等。6、RT-PCR檢測(cè)取冰凍腎臟組織,提取總的RNA,用RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)硫化氫合成酶CBS、CSE、3-MST的m RNA表達(dá)變化,檢測(cè)TNF-α、IL-6、MCP-1、KIM-1、IL-10等在腎臟中的基因表達(dá)情況。7、Western Blot檢測(cè)用RIPA裂解腎臟組織,用BCA法進(jìn)行總蛋白定量檢測(cè)。Western Blot檢測(cè)腎臟組織中NF-κB亞基p50/p65和磷酸化的p65的蛋白含量,以及TNF-α蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1、持續(xù)4周腹腔內(nèi)注射硫氫化鈉溶液治療后,與HFD+NS組相比,HFD+Na HS組小鼠的體重減少。2、持續(xù)4周腹腔內(nèi)注射硫氫化鈉溶液治療后:(1)與LFD+NS組相比,HFD+NS組小鼠的血漿中Cys C、KIM-1、TG、TC含量明顯升高、HDL-C含量降低;(2):與HFD+NS組相比,HFD+Na HS組小鼠的血漿中Cys C、KIM-1、TG、TC含量降低、HDL-C含量升高;(3):血尿素、血肌酸酐四組兩兩相比無(wú)明顯差異。3、持續(xù)4周腹腔內(nèi)注射硫氫化鈉溶液治療后,與HFD+NS組相比,HFD+Na HS組小鼠的腎小球體積變小,鮑曼氏腔隙變寬,腎小球局灶結(jié)節(jié)化等病理變化都有所好轉(zhuǎn)。4、持續(xù)4周腹腔內(nèi)注射硫氫化鈉溶液治療后:(1):與LFD+NS組相比,HFD+NS組的小鼠腎組織中TNF-α、IL-6、MCP-1的含量升高,RNA表達(dá)水平增加;(2):與HFD+NS組相比,HFD+Na HS組小鼠的腎臟中TNF-α、IL-6、MCP-1的含量降低,基因表達(dá)水平下降,IL-10的分泌量增加和基因表達(dá)水平升高;(3):與HFD+NS組相比,HFD+Na HS組的p65/p50的蛋白表達(dá)含量減少,同時(shí)TNF-α的蛋白表達(dá)含量下降。結(jié)論硫化氫可以通過(guò)下調(diào)p50和p65以及Phos Pho-p65的蛋白表達(dá),抑制炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-6等因子的合成和分泌,促進(jìn)抗炎性細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)水平,從而肥胖小鼠的慢性腎損傷起到保護(hù)作用。
[Abstract]:The study shows that obesity is the main cause of metabolic syndrome , and obesity can not only induce diabetes , hypertension and insulin resistance ( IR ) . In 1990 , it has been shown that hydrogen sulfide ( H2S ) can be used as a neurotransmitter to regulate nerve function , and hydrogen sulfide ( H2S ) can be used as a neurotransmitter to regulate nerve function , hydrogen sulfide synthetase in cell can be used as raw material to synthesize , and hydrogen sulfide is widely accepted by people as endogenous gas signal molecule ( or cognition ) . In order to study the effects of hydrogen sulfide on renal injury induced by obesity , we studied the effects of hydrogen sulfide on kidney injury . The levels of TNF - 偽 , IL - 6 , IL - 6 , MCP - 1 , IL - 10 in renal tissue were measured by ELISA . The levels of TNF - 偽 , IL - 6 , MCP - 1 , MCP - 1 , IL - 10 were measured by ELISA . ( 2 ) Compared with HFD + NS group , the contents of TNF - 偽 , IL - 6 , MCP - 1 in renal tissues of HFD + NS group decreased , the level of IL - 6 and MCP - 1 decreased , the level of IL - 10 secretion increased and the level of gene expression increased , and ( 3 ) : Compared with HFD + NS group , the levels of TNF - 偽 , IL - 6 and MCP - 1 in HFD + NS group were decreased . Conclusion Hydrogen sulfide can inhibit the synthesis and secretion of TNF - 偽 and IL - 6 , and promote the expression of anti - inflammatory cytokines IL - 10 .
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R589.2

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本文編號(hào)：2131001