【摘要】：目的:探討糖基化終產(chǎn)物(AGEs)與其受體(RAGE)及其下游信號(hào)通路在腸道L細(xì)胞(GLUTag)凋亡中的作用。方法:首先將不同濃度的AGEs作用于GLUTag細(xì)胞24 h后,RT-PCR及Western blot檢測各組細(xì)胞RAGE mRNA及蛋白表達(dá)水平。然后將細(xì)胞分為BSA對照組、AGEs 200μg/mL組、AGEs+siRNA-RAGE組、AGEs+apocynin組。采用Annexin V-FITC/PI檢測細(xì)胞凋亡率,熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,Western blot檢測NADPH氧化酶亞單位p22~(phox)、p47~(phox)磷酸化水平和Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:AGEs干預(yù)后GLUTag細(xì)胞RAGE mRNA及蛋白表達(dá)水平呈劑量依賴性增加。AGEs單獨(dú)處理組與BSA對照組相比,細(xì)胞凋亡率顯著增加,NADPH氧化酶亞單位p22~(phox)、p47~(phox)的表達(dá)增多,細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高,促凋亡蛋白Bax表達(dá)上調(diào),抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)。AGEs+apocynin組、AGEs+siRNA-RAGE組與AGEs單獨(dú)處理組相比,細(xì)胞凋亡率顯著下降,NADPH氧化酶亞單位p22~(phox)、p47~(phox)的表達(dá)減少,細(xì)胞內(nèi)ROS水平下降,促凋亡蛋白Bax表達(dá)下調(diào),抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)上調(diào)。結(jié)論:AGEs作用于GLUTag,可上調(diào)細(xì)胞RAGE受體表達(dá),激活NADPH氧化酶,使細(xì)胞內(nèi)ROS生成增多,進(jìn)而通過p53/Bax途徑誘導(dǎo)GLUTag凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of advanced glycation end product (ages) and its receptor (rage) and its downstream signaling pathway in the apoptosis of intestinal L cells (GLUTag). Methods: the expression of rage mRNA and protein was detected by RT-PCR and Western blot after different concentrations of ages were treated on GLUTag cells for 24 h. Then the cells were divided into two groups: BSA control group (ages 200 渭 g / mL) and ages siRNA-rage group (ages apocynin). Apoptosis rate was detected by Annexin V-FITC / Pi, reactive oxygen species (Ros) level was detected by fluorescence probe, phosphorylation level of NADPH oxidase subunit p22 ~ (phox) p47 ~ (phox) and expression of Bcl-2P Bax protein were detected by Western blot. Results the expression of rage mRNA and protein in GLUTag cells was increased in a dose-dependent manner. Compared with the control group, the apoptosis rate of GLUTag cells was significantly increased, and the expression of p22 ~ (phox) oxidase subunit p22 ~ (phox) p47 ~ (phox) was increased, and the intracellular Ros level was increased. The expression of pro-apoptotic protein Bax was up-regulated, and the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 was down-regulated. AGEs siRNA-rage group significantly decreased the expression of p22 ~ (phox) oxidase subunit p22 ~ (phox) p47 ~ (phox), and the intracellular Ros level in AGEs apocynin group. The expression of pro-apoptotic protein Bax was down-regulated and the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 was up-regulated. Conclusion the expression of rage receptor was up-regulated, NADPH oxidase was activated, Ros production was increased and GLUTag apoptosis was induced by p53 / Bax pathway.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(編號(hào):81500623) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2014A020212489)
【分類號(hào)】：R587.1

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本文編號(hào)：2130948