【摘要】：目的:探討糖基化終產物(AGEs)與其受體(RAGE)及其下游信號通路在腸道L細胞(GLUTag)凋亡中的作用。方法:首先將不同濃度的AGEs作用于GLUTag細胞24 h后,RT-PCR及Western blot檢測各組細胞RAGE mRNA及蛋白表達水平。然后將細胞分為BSA對照組、AGEs 200μg/mL組、AGEs+siRNA-RAGE組、AGEs+apocynin組。采用Annexin V-FITC/PI檢測細胞凋亡率,熒光探針檢測細胞內活性氧水平,Western blot檢測NADPH氧化酶亞單位p22~(phox)、p47~(phox)磷酸化水平和Bcl-2、Bax蛋白表達水平。結果:AGEs干預后GLUTag細胞RAGE mRNA及蛋白表達水平呈劑量依賴性增加。AGEs單獨處理組與BSA對照組相比,細胞凋亡率顯著增加,NADPH氧化酶亞單位p22~(phox)、p47~(phox)的表達增多,細胞內ROS水平升高,促凋亡蛋白Bax表達上調,抗凋亡蛋白Bcl-2表達下調。AGEs+apocynin組、AGEs+siRNA-RAGE組與AGEs單獨處理組相比,細胞凋亡率顯著下降,NADPH氧化酶亞單位p22~(phox)、p47~(phox)的表達減少,細胞內ROS水平下降,促凋亡蛋白Bax表達下調,抗凋亡蛋白Bcl-2表達上調。結論:AGEs作用于GLUTag,可上調細胞RAGE受體表達,激活NADPH氧化酶,使細胞內ROS生成增多,進而通過p53/Bax途徑誘導GLUTag凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of advanced glycation end product (ages) and its receptor (rage) and its downstream signaling pathway in the apoptosis of intestinal L cells (GLUTag). Methods: the expression of rage mRNA and protein was detected by RT-PCR and Western blot after different concentrations of ages were treated on GLUTag cells for 24 h. Then the cells were divided into two groups: BSA control group (ages 200 渭 g / mL) and ages siRNA-rage group (ages apocynin). Apoptosis rate was detected by Annexin V-FITC / Pi, reactive oxygen species (Ros) level was detected by fluorescence probe, phosphorylation level of NADPH oxidase subunit p22 ~ (phox) p47 ~ (phox) and expression of Bcl-2P Bax protein were detected by Western blot. Results the expression of rage mRNA and protein in GLUTag cells was increased in a dose-dependent manner. Compared with the control group, the apoptosis rate of GLUTag cells was significantly increased, and the expression of p22 ~ (phox) oxidase subunit p22 ~ (phox) p47 ~ (phox) was increased, and the intracellular Ros level was increased. The expression of pro-apoptotic protein Bax was up-regulated, and the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 was down-regulated. AGEs siRNA-rage group significantly decreased the expression of p22 ~ (phox) oxidase subunit p22 ~ (phox) p47 ~ (phox), and the intracellular Ros level in AGEs apocynin group. The expression of pro-apoptotic protein Bax was down-regulated and the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 was up-regulated. Conclusion the expression of rage receptor was up-regulated, NADPH oxidase was activated, Ros production was increased and GLUTag apoptosis was induced by p53 / Bax pathway.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院內分泌科;
【基金】：國家自然科學基金青年基金項目(編號:81500623) 廣東省科技計劃項目(編號:2014A020212489)
【分類號】：R587.1

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本文編號：2130948