發(fā)布時間：2018-07-09 19:28

  本文選題：關(guān)節(jié)炎 + 類風(fēng)濕�。� 參考：《揚(yáng)州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：引言類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthrits,RA)是主要累及小關(guān)節(jié)的滑膜慢性炎癥,屬于自身免疫性疾病范疇,常常會引起關(guān)節(jié)腫痛、軟骨破壞、關(guān)節(jié)間隙變窄、關(guān)節(jié)畸形等改變,若得不到及時和正確的診治會造成人體不同程度的殘疾[1]。該病屬于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的痹癥范疇,常見癥型有4種:風(fēng)寒濕痹、風(fēng)濕熱痹、痰瘀痹阻、肝腎陰虛等。RA患者骨與關(guān)節(jié)的早期病理變化是骨質(zhì)疏松(Osteoporosis,OP),有研究指出RA患者普遍存在骨量流失的現(xiàn)象。Wnt信號通路在炎癥與骨代謝方面發(fā)揮重要作用,主要通過Wnt家族蛋白或信號通路上相關(guān)蛋白通過自分泌或旁分泌的方式與細(xì)胞膜上相應(yīng)受體結(jié)合,激活細(xì)胞質(zhì)中的對應(yīng)信號分子,從而促進(jìn)下游基因轉(zhuǎn)錄。蜂毒素(Melittin),是蜂毒中具有藥物作用的主要活性物質(zhì),具有抗炎、抗菌與鎮(zhèn)痛藥用價值。有研究表明蜂毒素能夠有效抑制多種病原微生物生長。蜂針、蜂療已有千年歷史,尤其是在治療關(guān)節(jié)炎等炎性疼痛方面,療效顯著。但蜂毒素存在易溶血和易過敏的不良反應(yīng),限制其應(yīng)用范圍。杜仲(EucommiaulmoidesOliver)為落葉喬木,《神農(nóng)本草經(jīng)》記載杜仲“主治腰膝痛,補(bǔ)中,益精氣,堅筋骨,除陰下癢濕,小便余瀝。久服,輕身耐老”的作用。杜仲是中國特有藥材,廣泛應(yīng)用于臨床,其性甘,溫。歸肝、腎經(jīng)�，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn):杜仲對中樞神經(jīng)、循環(huán)、免疫、內(nèi)分泌、泌尿系統(tǒng)均存在不同程度的調(diào)節(jié)作用。有大量研究表明杜仲提取物在體外有較顯著的抗氧化溶血而保護(hù)紅細(xì)胞的作用。杜仲黃酮是杜仲的有效提取物。蜂毒素具有易溶血的不良反應(yīng),而杜仲具有明顯的抗溶血作用,故將二者聯(lián)合使用觀察杜仲能否減輕蜂毒素的溶血作用,進(jìn)而增加抗炎作用。本文從細(xì)胞、分子、動物層面探究蜂毒素、杜仲黃酮單用及聯(lián)合給藥的最佳藥物濃度及治療效果。研究發(fā)現(xiàn)CIA模型小鼠關(guān)節(jié)會出現(xiàn)骨量不均的現(xiàn)象,與人類RA的早期病理改變——骨質(zhì)疏松相似,中醫(yī)強(qiáng)調(diào)關(guān)節(jié)乃骨之連接,筋脈聚集之所,肝主筋、腎主骨,本文在動物實驗的基礎(chǔ)上進(jìn)行了肝腎陰虛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床發(fā)病情況及與骨質(zhì)疏松的關(guān)聯(lián)的探討。本論文共分為三部分研究內(nèi)容。第一部分蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮通過WNT信號通路抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞生長機(jī)制的研究目的:探究蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路上Wnt-1,Dkk-1,C-myc,β-catenin蛋白抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞的生長機(jī)制。方法:選擇類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞(RA-FLS)培養(yǎng)至3-7代,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)記抗體,驗證為RA-FLS細(xì)胞。待細(xì)胞增殖至適當(dāng)數(shù)目后接種于六孔板中,除空白對照外其余各孔加入10ng/mLTNF-α誘導(dǎo)RA-FLS細(xì)胞成為異常增殖的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎細(xì)胞模型。用不同濃度的蜂毒素、杜仲黃酮、蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮混合制劑處理RA-FLS細(xì)胞模型,MTT法檢測細(xì)胞增殖情況。Western Blot檢測不同處理組Wnt-1、β-catenin、C-myc及DKK-1蛋白的表達(dá)情況。所有實驗結(jié)果運(yùn)用SPSS19.0進(jìn)行整理與分析。結(jié)果:濃度為1、10、100、1000ng/μL的蜂毒素、杜仲黃酮無論是單獨還是聯(lián)合使用均可以有效地減低RA-FLS的生存率。其中藥物濃度為1000ng/μL蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮對細(xì)胞抑制率最高,達(dá)到89.73%.用藥后Wnt-1、β-catenin、C-myc、DKK-1蛋白的表達(dá)量均較TNF-a誘導(dǎo)的RA-FLS模型組明顯降低,蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮組的蛋白含量最低。(p0.05)結(jié)論:蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮能夠有效抑制被TNF-a誘導(dǎo)刺激異常增殖的RA-FLS的生長,藥物濃度為1000ng/μL效果最好,作用機(jī)制可能是通過抑制Wnt信號通路Wntl、β-catenin、C-myc、DKK-1蛋白的表達(dá)。第二部分外用蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮治療膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠模型目的:觀察外用蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮治療膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠模型的效果。方法:將昆明小鼠分為空白對照組與造模組,造模組按照膠原誘導(dǎo)型(CIA)小鼠造模方法制備成關(guān)節(jié)炎小鼠,分為PBS組、蜂毒素組、杜仲黃酮組及混合給藥組。按分組不同,每組給予不同的藥物(藥物濃度均為1μg/μL)外涂。每只足爪給予5pL藥物,共給藥15天,PBS對照組給予等量的PBS。每日測量小鼠的足墊厚度及踝關(guān)節(jié)的寬度;給藥前后均進(jìn)行足爪部位X線檢查;待給藥結(jié)束后處死小鼠,ELISA法檢測相關(guān)因子(TNF-α、IL-1β、IL-2、GM-CSF);計算關(guān)節(jié)腫脹度及脾指數(shù)。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計處理。全結(jié)果:肉眼觀察可見,蜂毒素、杜仲黃酮及混合給藥組的小鼠足爪的腫脹程度均輕于造模PBS組;通過足墊厚度、足踝寬度及足爪腫脹度測量比較后發(fā)現(xiàn),給藥組小鼠的關(guān)節(jié)腫脹情況均得到緩解,其中混合給藥組小鼠的關(guān)節(jié)改善情況優(yōu)于其他組(p0.05);ELISA檢測小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-2、GM-CSF等炎癥因子發(fā)現(xiàn),混合給藥組小鼠各項免疫學(xué)指標(biāo)改變優(yōu)于其他組(p0.05)。結(jié)論:外涂蜂毒素、杜仲黃酮、蜂毒素聯(lián)合杜仲黃酮均可以有效改善CIA小鼠的關(guān)節(jié)腫脹情況,其中混合給藥組效果最好,具體的作用機(jī)制可能是抑制相關(guān)炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-2、GM-CSF)的表達(dá)。第三部分:肝腎陰虛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與骨質(zhì)疏松相關(guān)性臨床研究目的:探究肝腎陰虛型RA患者伴發(fā)骨質(zhì)疏松的發(fā)生情況,并從類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)指標(biāo)、急性炎癥指標(biāo)、骨代謝指標(biāo)、骨密度結(jié)果分析其相關(guān)性。方法:選擇2015年10月～2016年5月來自上海光華中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院關(guān)節(jié)內(nèi)科的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎住院病人。參與研究的患者應(yīng)排除相關(guān)禁忌,參與本研究前未進(jìn)行過正規(guī)抗骨質(zhì)疏松治療,且女性均為絕經(jīng)后患者,男性年紀(jì)均超過50歲。完成相關(guān)調(diào)查表的填寫,主要對其血常規(guī)、急性炎癥指標(biāo)(血沉ESR,C-反應(yīng)蛋白CRP)、類風(fēng)濕因子(IgMRF、IgARF、IgGRF)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗CCP抗體)、骨代謝指標(biāo)(骨鈣素OT;Ⅰ型膠原交聯(lián)C末端肽CTX;Ⅰ型膠原N端前肽PINP;甲狀旁腺激素PTH;1,25(OH)2D3)檢測數(shù)值、腰椎和左髖部進(jìn)行常規(guī)骨密度(BMD)數(shù)值的填寫。所有實驗結(jié)果運(yùn)用SPSS19.0進(jìn)行整理與分析。結(jié)果:共64名RA患者參與研究,其中30人同時伴發(fā)骨質(zhì)疏松(46.88%)�；颊叩难t蛋白值在骨量正常與骨量減少、骨量正常與骨質(zhì)疏松組間存在統(tǒng)計學(xué)差異,骨量正常組的血紅蛋白數(shù)值較高。抗CCP抗體、IgMRF與髖部BMD水平呈明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。年齡、抗CCP抗體滴度、ESR情況均為是否發(fā)生伴發(fā)骨質(zhì)疏松的危險因素。年齡大于65歲患者較其他患者骨質(zhì)疏松的風(fēng)險多一倍;高滴度抗CCP抗體患者腰椎OP的發(fā)生情況比其他患者高13倍;高滴度抗CCP抗體患者髖部OP的發(fā)生情況其他患者的4倍余;血沉異常患者的腰椎及髖部OP的發(fā)生情況均較其他患者多9倍。結(jié)論:年齡大于65歲,抗CCP抗體和ESR水平較高、血紅蛋白水平較低的肝腎陰虛型RA患者更易伴發(fā)骨質(zhì)疏松。
[Abstract]:Rheumatoid arthritis ( RA ) is a kind of chronic inflammation of synovial membrane which is mainly involved in facet joint , and belongs to the category of autoimmune diseases . It often causes joint swelling and pain , cartilage destruction , joint gap narrowing , joint deformity and so on . In this paper , there are four kinds of diseases , such as wind - cold - dampness , rheumatalgia , phlegm - stasis , liver - kidney yin deficiency , etc . In this paper , we studied the expression of Wnt - 1 , 尾 - catenin , C - myc and DKK - 1 protein in RA - FLS cells . The results showed that the concentration of total flavonoids was 1 , 10 , 100 , 1000ng / 渭L , and the expression of Wnt - 1 , 尾 - catenin , C - myc and DKK - 1 protein in different treatment groups was significantly lower than that of TNF - a - induced RA - FLS . The results showed that the mice were divided into two groups : PBS group , TNF - 偽 , IL - 1尾 , IL - 2 and GM - CSF . Objective : To study the correlation between the levels of bone mineral density ( BMD ) in patients with liver and kidney yin deficiency type RA patients .
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R593.22
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本文編號：2110421