本文選題：旁分泌因子 + δ細(xì)胞　； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：糖尿病是以胰島素分泌不足、胰島素抵抗或者兩者兼有而導(dǎo)致血糖升高為顯著特征的代謝紊亂性疾病。近年來,隨著科技進(jìn)步,人們的生產(chǎn)和生活方式發(fā)生了重大變化,體力活動(dòng)減少而熱量攝入增加,糖尿病的發(fā)病率逐年升高。胰島在血糖穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中起著十分重要的作用,居于核心地位,其功能缺陷是糖尿病發(fā)生發(fā)展的重要因素。胰島中至少包含5種類型的內(nèi)分泌細(xì)胞:數(shù)量最多β細(xì)胞構(gòu)成胰島的核心,約占70%,主要分泌胰島素(Insulin);其次是α細(xì)胞,約占20%,主要分泌胰高血糖素(Glucagon);再次是δ細(xì)胞,約占5%,主要分泌生長(zhǎng)抑素(Somatostatin);此外還有ε細(xì)胞分泌饑餓激素(Ghrelin)和pp細(xì)胞分泌胰多肽(Pancreaticpolypeptide)。在人類胰島中大多數(shù)胰島β細(xì)胞與α細(xì)胞或δ細(xì)胞緊密相鄰,不同類型的細(xì)胞通過旁分泌作用互相影響構(gòu)成胰島微循環(huán)網(wǎng)絡(luò),共同調(diào)節(jié)胰島素和胰高血糖素分泌的相對(duì)比例和水平,從而保證機(jī)體在不同的生理環(huán)境下維持血糖代謝平衡。如β細(xì)胞分泌的胰島素和γ-氨基丁酸(GABA)能夠抑制α細(xì)胞分泌胰高血糖素;α細(xì)胞分泌的胰高血糖素能夠刺激β細(xì)胞分泌胰島素和δ細(xì)胞分泌生長(zhǎng)抑素;δ細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)抑素能夠抑制胰島素和胰高血糖素的分泌。旁分泌作用紊亂會(huì)導(dǎo)致胰島微循環(huán)回路的瓦解破壞,進(jìn)而導(dǎo)致糖代謝紊亂,這是糖尿病發(fā)生發(fā)展的重要原因。例如,胰島β細(xì)胞分泌的重要旁分泌因子UCN3的喪失會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)抑素介導(dǎo)的胰島δ細(xì)胞和β細(xì)胞負(fù)反饋調(diào)節(jié)回路的功能失調(diào),導(dǎo)致葡萄糖誘導(dǎo)胰島素釋放反應(yīng)的異常,進(jìn)一步引發(fā)糖尿病的發(fā)生。δ細(xì)胞分泌生長(zhǎng)抑素能夠負(fù)性調(diào)節(jié)胰島素和胰高血糖素的分泌,降低血液中兩種激素水平,也是胰島中重要的旁分泌因子。近年來δ細(xì)胞在維持體內(nèi)血糖代謝平衡方面的重要作用受到越來越多的關(guān)注,成為糖尿病研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)抑素的分泌受到細(xì)胞內(nèi)Ca2+和cAMP的調(diào)節(jié)。葡萄糖誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑素分泌主要依賴于鈣致鈣釋放(CICR),而且R型鈣通道和L型鈣通道在其中起重要作用。R型鈣通道Cav2.3敲除小鼠(Cav2.3-/-)的胰島中,葡萄糖誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑素分泌量相比野生型減少75%。β細(xì)胞分泌的旁分泌因子UCN3能夠增強(qiáng)葡萄糖刺激引起的δ細(xì)胞生長(zhǎng)抑素分泌,而L型鈣通道阻斷劑伊拉地平(isradipine)能夠消除UCN3的增強(qiáng)作用。我們實(shí)驗(yàn)室最新的研究表明持續(xù)的UCN3刺激能夠降低CRL4B-PRC2復(fù)合體的表達(dá)水平,減輕了 CRL4B-PRC2復(fù)合體對(duì)δ細(xì)胞中Cav1.2表達(dá)的抑制作用,使Cav1.2表達(dá)水平升高,進(jìn)而促進(jìn)生長(zhǎng)抑素的分泌。除UCN3外,胰島素和GABA也是β細(xì)胞分泌的重要旁分泌因子。因此本文主要探討β細(xì)胞分泌的旁分泌因子胰島素和GABA是否能夠調(diào)控δ細(xì)胞中Cav1.2、Cav1.3和Cav2.3的表達(dá),并對(duì)胰島素調(diào)控Cav1.2表達(dá)的信號(hào)通路機(jī)制進(jìn)行初步研究。研究目的:研究旁分泌因子對(duì)胰島δ細(xì)胞Cav1.2、Cav1.3和Cav2.3的表達(dá)調(diào)控。研究方法:1. RT-PCR和q-RT-PCR檢測(cè)在胰島素、GABA和UCN3刺激下δ細(xì)胞中Cav1.2、Cav1.3 和 Cav2.3mRNA 水平的變化。2. WESTERN BLOT檢測(cè)在胰島素、GABA和UCN3刺激下δ細(xì)胞中Cav1.2、Cav1.3和Cav2.3蛋白表達(dá)水平的變化。3. WESTERN BLOT檢測(cè)δ細(xì)胞在胰島素刺激下ERK1/2和AKT的磷酸化水平的變化。4. RT-PCR和q-RT-PCR檢測(cè)在胰島素與ERK1/2阻斷劑U0126或AKT阻斷劑MK2206共同孵育下δ細(xì)胞中Cav1.2 mRNA水平的變化。5. WESTERN BLOT檢測(cè)在胰島素與ERK阻斷劑U0126或AKT阻斷劑MK2206共同孵育下δ細(xì)胞中Cav1.2蛋白水平的變化。6.膜片鉗電生理檢測(cè)δ細(xì)胞鈣電流。研究結(jié)果:1.持續(xù)的胰島素和UCN3刺激均能使δ細(xì)胞中Cav1.2的mRNA水平明顯升高,持續(xù)的GABA刺激使Cav1.3和Cav2.3mRNA水平明顯升高。2.持續(xù)的胰島素和UCN3刺激均能使δ細(xì)胞中Cav1.2的蛋白表達(dá)顯著升高,持續(xù)的GABA刺激使Cav1.3和Cav2.3的蛋白表達(dá)顯著升高。3.胰島素刺激下δ細(xì)胞中ERK和AKT的磷酸化水平有明顯變化。4. ERK阻斷劑U0126能夠明顯抑制胰島素對(duì)δ細(xì)胞中Cav1.2的表達(dá)調(diào)控,而AKT的阻斷劑MK-2206則無明顯抑制作用。5.膜片鉗電生理可以檢測(cè)到δ細(xì)胞的鈣電流。研究結(jié)論:1.持續(xù)的UCN3和胰島素刺激使δ細(xì)胞中的Cav1.2表達(dá)量顯著升高。2.持續(xù)GABA刺激使δ細(xì)胞中的Cav1.3和Cav2.3表達(dá)量顯著升高。3. ERK阻斷劑U0126能夠顯著降低胰島素對(duì)δ細(xì)胞中的Cav1.2調(diào)控作用。胰島素可能通過MAPK-ERK通路調(diào)控δ細(xì)胞中的Cav1.2的表達(dá)。
[Abstract]:Insulin and gamma - aminobutyric acid ( GABA ) secreted by 偽 - cells can inhibit the secretion of insulin and glucagon . 1 . The changes of Cav1.2 , Cav1.3 and Cav2.3 mRNA levels in 未 cells stimulated by insulin , GABA and UCN3 were detected by RT - PCR and q - RT - PCR . Western BLOT detected changes in the expression levels of Cav1.2 , Cav1.3 , and Cav2.3 in delta cells stimulated by insulin , GABA , and UCN3 . The Western BLOT detected a change in the phosphorylation level of 1 / 2 and / 2 in delta cells stimulated by insulin . RT - PCR and q - RT - PCR were used to detect changes in Cav1.2 mRNA levels in delta cells incubated with the insulin - 1 / 2 blocker , U0126 , or in the presence of a blocking agent MK2206 . Results : 1 . Continuous insulin and UCN3 stimulation could significantly increase the expression of Cav1.2 mRNA in 未 cells . The persistent GABA stimulation significantly increased the protein expression of Cav1.2 in 未 cells . The persistent GABA stimulation significantly increased the expression of Cav1.2 in 未 cells . ERK blocker U0126 can obviously inhibit the expression regulation of Cav1.2 in 未 cells , but there is no obvious inhibitory effect on the blocking agent MK - 2 in 未 cells . Conclusion : 1 . Continuous UCN3 and insulin stimulation significantly increase the expression of Cav1.2 in 未 cells . ERK blocker U0126 can significantly reduce the effect of insulin on Cav1.2 in delta cells . Insulin may regulate the expression of Cav1.2 in delta cells via MAPK - ERK pathway .
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.1

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