本文選題：富血小板血漿 + 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞　； 參考：《揚(yáng)州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的：富血小板血漿(platelet-rich plasma, PRP)是一種含有大量血小板和各種生長(zhǎng)因子的自體血漿。當(dāng)PPR被凝血酶、氯化鈣激活后,PRP中的α顆粒經(jīng)脫顆粒的方式,釋放出大量的生長(zhǎng)因子,包括血小板衍生生長(zhǎng)因子(Platelet-derived growth factor, PDGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(Transforming growth factor-β, TGF-β)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因了(Vascular endothelial growth factor, VEGF)和胰島素樣生長(zhǎng)因子(Insulin-like growth factor, IGF)等,而這些生長(zhǎng)因子在細(xì)胞的增殖、分化、骨質(zhì)產(chǎn)生、軟組織愈合和膠原合成等方面起著重要的作用。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一類以炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和滑膜增生為特點(diǎn),最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)的破壞和畸形的慢性自身免疫性疾病。滑膜樣成纖維細(xì)胞(Fibroblast-like synovial cells, FLS)在RA的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用,RA-FLS能夠粘附細(xì)胞外基質(zhì),分泌金屬基質(zhì)蛋白酶,遷移、侵襲至關(guān)節(jié)軟骨,造成關(guān)節(jié)的破壞。有研究報(bào)道血小板數(shù)目的增多和RA的疾病活動(dòng)度相關(guān),本文在主要目的是探討PRP對(duì)RA-FLS遷移和侵襲的影響。方法：1.利用凝血酶和氯化鈣活化PRP,離心后取上清用于實(shí)驗(yàn)；2.利用劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)研究PRP對(duì)RA-FLS細(xì)胞遷移和侵襲的影響；3. 利用RA-FLS與I型膠原粘附實(shí)驗(yàn)研究PRP對(duì)RA-FLS與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)粘附的影響；4.利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察PRP對(duì)RA-FLS細(xì)胞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重排、絲狀和片狀偽足形成的影響；5. 利用RT-qPCR檢測(cè)PRP作用后RA-FLS細(xì)胞中MMPs的mRNA的表達(dá)。結(jié)果：1.劃痕實(shí)驗(yàn)顯示PRP能夠促進(jìn)RA-FLS細(xì)胞的遷移；Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相較于NC組,2%PRP和5%PRP組穿過小室的相對(duì)細(xì)胞數(shù)分別為2.02±0.78,2.59±0.90(P0.05)。2. Transwe 11細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相較于NC組,2%PRP和5%PRP組的細(xì)胞穿越Matrigel屏障的相對(duì)細(xì)胞數(shù)分別為1.50±0.22,2.68±0.35(P0.05)。3. RA-FLS細(xì)胞與I型膠原粘附實(shí)驗(yàn)顯示,相較于NC組,2%PRP和5%PRP組的細(xì)胞粘附于I型膠原的相對(duì)細(xì)胞數(shù)分別為1.50±0.27,1.87±0.62(P0.05)。4.免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PRP能夠促進(jìn)RA-FLS細(xì)胞骨架的重排,板狀偽足和絲狀偽足增多,張力纖維減少。5. RT-qPCR顯示PRP能夠促進(jìn)RA-FLS上調(diào)MMP-1、MMP-3、MMP-10的mRNA的表達(dá)。結(jié)論：1.PRP促進(jìn)RA-FLS細(xì)胞的遷移、侵襲和粘附；2.PRP可能通過調(diào)控RA-FLS細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架纖維的重排、上調(diào)MMP-1、MMP-3和MMP-10 mRNA的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)其促進(jìn)遷移、侵襲和黏附作用的；
[Abstract]:Background & AIM: platelet-rich plasma is a kind of autologous plasma containing lots of platelets and various growth factors. When PPR was activated by thrombin and calcium chloride, 偽 particles in PRP were degranulated, and a large number of growth factors were released. These include platelet-derived growth factor (PDGF), transforming growth factor- 尾 (TGF- 尾), vascular endothelial growth factor, growth factor (Vascular endothelial growth factor, VEGF) and insulin-like growth factor (IGF). Soft tissue healing and collagen synthesis play important roles. Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune disease characterized by inflammatory cell infiltration and synovial hyperplasia, which ultimately leads to joint destruction and malformation. Fibroblast-like synovial cells (FLS) play an important role in the genesis and development of RA. RA-FLS can adhere to extracellular matrix, secrete metalloproteinases, migrate and invade articular cartilage, resulting in joint destruction. It has been reported that the increase of platelet count is related to the disease activity of RA. The main purpose of this study is to investigate the effects of PRP on RA-FLS migration and invasion. Method 1: 1. PRP was activated by thrombin and calcium chloride. The effect of PRP on the migration and invasion of RA-FLS cells was studied by scratch test. The effect of RA-FLS on the adhesion of RA-FLS to extracellular matrix (extracellular matrix,) was studied by using RA-FLS and type I collagen adhesion test. The effects of PRP on actin cytoskeleton rearrangement filamentous and lamellar pseudopodia formation in RA-FLS cells were observed by immunofluorescence assay. The mRNA expression of MMPs in RA-FLS cells treated with PRP was detected by RT-qPCR. The result is 1: 1. The results of scratch test showed that PRP could promote the migration of RA-FLS cells. The results showed that compared with NC group, the relative number of cells passing through the compartment of PRP group and 5PRP group was 2.02 鹵0.78U 2.59 鹵0.90 (P0.05) .2. Compared with NC group, the relative number of cells passing through Matrigel barrier was 1.50 鹵0.222.68 鹵0.35 (P0.05). The adhesion of RA-FLS cells to type I collagen was found to be 1.50 鹵0.270.87 鹵0.62 (P0.05) compared with NC group (1.50 鹵0.27) and 5PRP group (P < 0.05). The results of immunofluorescence assay showed that PRP could promote the cytoskeleton rearrangement of RA-FLS cells, increase the number of platelike pseudopodia and filamentous pseudopodia, and decrease the tension fiber. RT-qPCR showed that PRP could up-regulate the expression of MMP-3 MMP-10 mRNA in RA-FLS. Conclusion: 1. PRP promotes the migration of RA-FLS cells. 2. PRP may promote the migration, invasion and adhesion of RA-FLS cells by regulating the rearrangement of actin skeleton fibers and up-regulating the expression of MMP-3 and MMP-10 mRNA in RA-FLS cells.
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R593.22

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本文編號(hào)：2058126